人γ-精浆蛋白的亲和纯化及其糖基化分析 |
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引用本文: | 张青,张思河,苏明权,沈建军,韦晓明,郝晓柯.人γ-精浆蛋白的亲和纯化及其糖基化分析[J].中国生物工程杂志,2007,27(2):99-102. |
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作者姓名: | 张青 张思河 苏明权 沈建军 韦晓明 郝晓柯 |
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作者单位: | 第四军医大学唐都医院检验科 信阳师范学院生命科学学院 信阳师范学院生命科学学院 信阳师范学院生命科学学院 信阳师范学院生命科学学院 第四军医大学西京医院检验科 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863计划);国家重大科技专项资金 |
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摘 要: | 目的:从人精液中提纯γ-精浆蛋白并对其生物学特性进行鉴定。 方法:应用饱和硫酸铵法从小鼠腹水中纯化出抗γ-精浆蛋白的单克隆抗体E4B7,将其共价交联到CNBr-Sepharose4B上,制备成免疫亲和层析柱,用该层析柱亲和纯化经饱和硫酸铵粗提的精液标本。纯化产物分别用SDS-PAGE、Western-blot及ELISA进行生物学特性鉴定,最后经PNGase F、Endo-H酶消化后进行糖基化分析。结果:SDS-PAGE电泳表明纯化蛋白的相对分子量约为44KD,Western-blot及ELISA鉴定显示该蛋白可与抗γ-精浆蛋白的单抗E4B7特异性结合。对纯化蛋白无论是单用Endo-H酶消化,还是同时用Endo-H酶和PNGase F酶共同消化,消化产物电泳后相对分子量均降低到34KD左右,而单独用PNGase F酶消化后相对分子量没有改变。Western-blot及ELISA鉴定显示糖苷酶处理后的纯化蛋白仍可与单抗E4B7特异性结合。结论:成功纯化出N-糖基化形式的γ-精浆蛋白,这为下一步筛选人源化抗体奠定了纯的抗原基础。
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关 键 词: | 糖基化 γ-精浆蛋白 亲和层析 |
收稿时间: | 2006-08-07 |
修稿时间: | 2006年8月4日 |
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