| 基于mRNA 5'端TIR区二级结构优化提高重组sTNFαRI在大肠杆菌中的表达水平 |
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| 引用本文： | 秦娇荣,赵兆,罗心梅,李春阳.基于mRNA 5'端TIR区二级结构优化提高重组sTNFαRI在大肠杆菌中的表达水平[J].中国生物工程杂志,2018,38(3):62-69. |
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| 作者姓名： | 秦娇荣 赵兆 罗心梅 李春阳 |
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| 作者单位： | 成都生物制品研究所有限责任公司 成都 610023 |
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| 摘 要： | 目的:通过优化PET11b-s TNFαRI 5'mRNA翻译起始区(TIR)二级结构从而提高可溶性肿瘤坏死因子I型受体(sTNFαRI)在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)]中的表达水平。方法:通过对PET11b-s TNFαRI mRNA 5'端TIR区二级结构的自由能及核苷酸位置熵分析,设计相应的引物对mRNA 5'翻译起始区(TIR)相应密码子进行突变,从而使核糖体结合位点(RBS)及起始密码子(AUG)暴露于发夹结构之外,此外将p ET11b核糖体结合位点由GAAGGAGA突变为GAAGAA,以利于翻译复合体的组装以及翻译起始。通过基因克隆的方法将5'端TIR区优化后的序列与s TNFαRI序列一起克隆到p ET11b载体中,并转化大肠杆菌BL21(DE3),阳性转化子经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测。结果:通过对PET11b-s TNFαRI 5'TIR mRNA二级结构优化,经SDS-PAGE和Western blot分析表明重组s TNFαRI的表达水平较优化前提高50%~60%。结论:通过对重组载体翻译起始区(TIR)mRNA序列的二级结构优化可以有效提高目的蛋白的表达水平,对进一步工业化生产具有重要的应用价值。
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| 关 键 词： | sTNFαRI mRNA二级结构 翻译起始区 自由能 |
| 收稿时间： | 2017-12-07 |
Increasing the Expression Level of Soluble Tumor Necrosis Factor Type I Based on Optimization of Secondary Structure of mRNA 5' Terminal TIR |
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| Jiao-rong QIN,Zhao ZHAO,Xin-mei LUO,Chun-yang LI.Increasing the Expression Level of Soluble Tumor Necrosis Factor Type I Based on Optimization of Secondary Structure of mRNA 5' Terminal TIR[J].China Biotechnology,2018,38(3):62-69. |
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| Authors: | Jiao-rong QIN Zhao ZHAO Xin-mei LUO Chun-yang LI |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | sTNFαRI mRNA secondary structure Translation initiation region Free energy |
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