| 地高辛标记Ucp2基因RNA探针的制备和应用 |
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| 引用本文： | 刘志贞,加三三,张凯丽,孙雨晴,赵虹,郝宇卉,牛勃,李美宁.地高辛标记Ucp2基因RNA探针的制备和应用[J].中国生物工程杂志,2018,38(9):55-58. |
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| 作者姓名： | 刘志贞 加三三 张凯丽 孙雨晴 赵虹 郝宇卉 牛勃 李美宁 |
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| 作者单位： | 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室 太原 030001 第四军医大学口腔颌面外科国家重点实验室 西安 710032 忻州职业技术学院医学系 忻州 034000 首都儿科研究所生物技术室 北京 100020 |
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| 基金项目： | * 国家自然科学基金(81741023);山西省回国留学人员科研基金(2016-051) |
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| 摘 要： | 目的:制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法:提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT-PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM-T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通过Sp6及T7 RNA聚合酶,获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后,通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果:成功获得Ucp2基因正义、反义探针,反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达,而正义探针未能检测到表达信号。结论:成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA原位杂交探针,为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达,尤其在神经组织的定位奠定基础。
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| 关 键 词： | Ucp2RNA探针 全胚胎原位杂交 |
| 收稿时间： | 2018-05-17 |
The Preparation and Application of the Ucp2 Gene RNA Probe Labeled by Digoxin |
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| Zhi-zhen LIU,San-san JIA,Kai-li ZHANG,Yu-qing SUN,Hong ZHAO,Yu-hui HAO,Bo NIU,Mei-ning LI.The Preparation and Application of the Ucp2 Gene RNA Probe Labeled by Digoxin[J].China Biotechnology,2018,38(9):55-58. |
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| Authors: | Zhi-zhen LIU San-san JIA Kai-li ZHANG Yu-qing SUN Hong ZHAO Yu-hui HAO Bo NIU Mei-ning LI |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Ucp2 RNA probe Whole embryo in situ hybridization |
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