| 人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白在CHO细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 李成媛,张晶晶,钱凯,缪亚娜,蔡燕飞,杨剑峰,何杨,金坚.人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白在CHO细胞中的表达[J].中国生物工程杂志,2016,36(7):7-14. |
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| 作者姓名： | 李成媛 张晶晶 钱凯 缪亚娜 蔡燕飞 杨剑峰 何杨 金坚 |
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| 作者单位： | 1 江南大学药学院 无锡 214122;
2 温州大学生命与环境科学学院 温州 325035;
3 苏州大学唐仲英血液学研究中心 苏州 215123;
4 苏州大学附属第一医院 苏州 215006 |
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| 基金项目： | “重大新药创制”国家科技重大专项（2013ZX09102033），国家“863”计划（2014AA021003，2015AA020802），国家自然科学基金（81273437）资助项目 |
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| 摘 要： | 干扰素α2b(interferonα2b,IFNα2b)是一种用于病毒性疾病和肿瘤性疾病治疗的多功能细胞因子,因其在体内的半衰期短限制了其在临床上的应用。将IFNα2b连接到人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的C端,构建融合蛋白HSA-IFNα2b。构建含融合蛋白的真核表达质粒p MH3/HSA-IFNa2b,经电转的方法转入中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞中。经G418抗性压力筛选和目的蛋白的表达量筛选,最终获得一株高表达的稳定细胞株(CHO/p MH3/HSA-IFNa2b)。表达的目的蛋白经Western blot验证显示,产物具有IFNα2b和HSA的双抗原性。经悬浮驯化稳定后,通过批次筛选得到一株稳定的高克隆表达株,产量约为65mg/L,进一步选取高表达克隆株在悬浮驯化中不同代数进行批次培养,不同代数之间蛋白质的表达量和生长情况没有明显的差异,获得一株稳定遗传表达的单克隆细胞株,3L摇瓶的流加培养结果显示,最佳发酵时间为15天,蛋白质表达量为121mg/L。经离心获得的发酵液,经两步纯化后获得蛋白质纯度高达96.8%的目的蛋白,总回收率为22.3%。参照《中国药典》2015版对IFNα2b的检测方法,结果显示,CHO表达的HSA-IFNα2b比活性为4.16×106IU/mg。首次将HSA-IFNα2b在哺乳动物细胞CHO中构建表达,表达获得高活性的HSA-IFNα2b融合蛋白。
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| 关 键 词： | 人血清白蛋白 中国仓鼠卵巢细胞 干扰素α2b |
| 收稿时间： | 2016-01-13 |
Expression of Human Serum Albumin-interferon α2b Fusion Protein in Chinese Hamster Ovary Cells |
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| LI Cheng-yuan,ZHANG Jing-jing,QIAN Kai,MIAO Ya-na,CAI Yan-fei,YANG Jian-feng,HE Yang,JIN Jian.Expression of Human Serum Albumin-interferon α2b Fusion Protein in Chinese Hamster Ovary Cells[J].China Biotechnology,2016,36(7):7-14. |
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| Authors: | LI Cheng-yuan ZHANG Jing-jing QIAN Kai MIAO Ya-na CAI Yan-fei YANG Jian-feng HE Yang JIN Jian |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Human serum albumin Chinese hamster ovary cell Interferon α2b |
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