| 高山被孢霉亚甲基四氢叶酸脱氢酶的克隆、表达和功能鉴定 |
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| 引用本文： | 王鸿超,张陈,陈殿宁,乔菊园,陈海琴,顾震南,张灏,陈卫,陈永泉.高山被孢霉亚甲基四氢叶酸脱氢酶的克隆、表达和功能鉴定[J].中国生物工程杂志,2016,36(11):23-29. |
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| 作者姓名： | 王鸿超 张陈 陈殿宁 乔菊园 陈海琴 顾震南 张灏 陈卫 陈永泉 |
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| 作者单位： | 江南大学食品学院 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年科学基金资助项目（31400038） |
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| 摘 要： | 叶酸代谢途径中的亚甲基四氢叶酸脱氢酶（MTHFD）可将5，10-亚甲基四氢叶酸氧化为5，10-甲炔基四氢叶酸，此过程会生成NADH或NADPH。对高山被孢霉中的MTHFD基因进行克隆、表达和功能鉴定，可进一步阐明脂质合成所需还原力NADPH的来源。首先对MTHFD序列进行分析，并以pET28a（+）质粒为载体构建了MTHFD的表达载体，然后转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达。进一步利用Ni金属螯合层析纯化目的蛋白，采用比色法分析酶反应产物，表明纯化蛋白质具有MTHFD活性。高山被孢霉MTHFD对NAD+和NADP+均具有催化能力，但更偏好于将NADP+转化为NADPH。最后对高山被孢霉进行发酵培养，发现MTHFD的转录水平在脂质开始积累后发生了明显的上调，表明MTHFD在高山被孢霉脂质合成过程中发挥重要作用，很可能是脂质合成所需NADPH的关键来源。这为对高山被孢霉进行分子改造，使之成为高产各种多不饱和脂肪酸的细胞工程提供了理论依据。
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| 关 键 词： | 脂质合成 功能鉴定 NADPH 亚甲基四氢叶酸脱氢酶 高山被孢霉 |
| 收稿时间： | 2016-05-16 |
Cloning,Expression and Function Analysis of Methylenetetrahydrofolate Dehydrogenase from Mortierella alpina |
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| WANG Hong chao,ZHANG Chen,CHEN Dian ning,QIAO Ju yuan,CHEN Hai qin,GU Zhen nan,ZHANG Hao,CHEN Wei,CHEN Yong quan.Cloning,Expression and Function Analysis of Methylenetetrahydrofolate Dehydrogenase from Mortierella alpina[J].China Biotechnology,2016,36(11):23-29. |
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| Authors: | WANG Hong chao ZHANG Chen CHEN Dian ning QIAO Ju yuan CHEN Hai qin GU Zhen nan ZHANG Hao CHEN Wei CHEN Yong quan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Characterization Methylenetetrahydrofolate dehydrogenase Lipid metabolism Mortierella alpina NADPH |
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