| Actinosynnema mirum DSM43827溶解性多糖单加氧酶的异源表达和酶学性质表征 |
| |
| 引用本文： | 施贤卫,张伟涛,张小飞,杨广宇,冯雁.Actinosynnema mirum DSM43827溶解性多糖单加氧酶的异源表达和酶学性质表征[J].中国生物工程杂志,2014,34(7):17-23. |
| |
| 作者姓名： | 施贤卫 张伟涛 张小飞 杨广宇 冯雁 |
| |
| 作者单位： | 上海交通大学生命科学技术学院 微生物代谢国家重点实验室 上海 200240 |
| |
| 基金项目： | 国家“863”计划资助项目(2013AA102801) |
| |
| 摘 要： | 溶解性多糖单加氧酶(lytic polysaccharide monooxygenases,LPMO)是近年来新发现的一类作用于结晶多糖(如纤维素和几丁质)的氧化酶;LPMO通过氧化的方式来裂解底物从而有利于水解酶系进一步作用,获得可溶性寡糖。为获得更多新酶资源,通过PCR方法从Actinosynnema mirum DSM 43827菌株中成功地克隆了编码LPMO的基因Amir_5334;将该基因构建到含麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein,MBP)标签的pET-28a(+)载体(pET-28a-MBP)上,并转化至E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达。利用镍柱亲和层析进行纯化,获得融合表达蛋白后,使用Factor Xa蛋白酶切除MBP标签,最终得到成熟的LPMO(Am5)。成熟Am5的预测分子量约为26 kDa,等电点为8.3。分析Am5序列发现,Am5与同家族中LPMO的序列一致性较低,具有良好的序列新颖性。酶学性质分析表明Am5是对几丁质有氧化活性而对纤维素无氧化活性的LPMO;与几丁质酶协同降解几丁质时可提高几丁质酶60%的水解效率;吸附实验显示,Am5对几丁质具有较强的吸附作用,而对纤维素吸附能力较弱。以上研究表明,Am5是一种针对几丁质底物具有高效选择性的新型氧化酶。
|
| 关 键 词： | 溶解性多糖单加氧酶 融合表达 酶学性质 几丁质 |
| 收稿时间： | 2014-05-16 |
The Heterologous Expression and Characterization of Lytic Polysaccharide Monooxygenase from Actinosynnema mirum DSM 43827 |
| |
| SHI Xian-wei,ZHANG Wei-tao,ZHANG Xiao-fei,YANG Guang-yu,FENG Yan.The Heterologous Expression and Characterization of Lytic Polysaccharide Monooxygenase from Actinosynnema mirum DSM 43827[J].China Biotechnology,2014,34(7):17-23. |
| |
| Authors: | SHI Xian-wei ZHANG Wei-tao ZHANG Xiao-fei YANG Guang-yu FENG Yan |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Lytic polysaccharide monooxygenases(LPMO) Fusion expression Enzymatic property Chitin |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国生物工程杂志》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国生物工程杂志》下载免费的PDF全文 |
|
