| 马铃薯α-淀粉酶在毕赤酵母中的表达、纯化及其酶学性质的研究 |
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| 引用本文： | 王永刚,马燕林,马建忠,马雪青,任海伟.马铃薯α-淀粉酶在毕赤酵母中的表达、纯化及其酶学性质的研究[J].中国生物工程杂志,2014,34(9):56-62. |
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| 作者姓名： | 王永刚 马燕林 马建忠 马雪青 任海伟 |
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| 作者单位： | 1. 兰州理工大学生命科学与工程学院 兰州 730050;
2. 中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点试验室 国家口蹄疫参考试验室 兰州 730046 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31060041);甘肃省自然科学基金(1212RJYA008,1212RJYA034)资助项目 |
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| 摘 要： | 采用RT-PCR法扩增马铃薯夏波蒂的α-淀粉酶成熟肽基因,将其亚克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9k上,SacII线性化重组表达载体,电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞,构建重组酵母GS115/pPIC9k-amy,利用锥虫蓝法筛选获得高活性转化子(GSamyA5),以终浓度为0.5%甲醇诱导该重组菌表达α-淀粉酶,通过Ni~(2+)-NTA agarose亲和层析纯化,并对其酶学性质进行研究。结果表明:该酶的最适反应温度为45℃,40~50℃酶活较稳定,保温50 min,残留相对活力达92.6%;最适反应pH值为6.0,并在pH 6.0~7.0范围内酶活保持稳定。Ca~(2+)、K~+可促进酶反应,以Ca~(2+)影响为最,相对酶活力提高到125%;Cu~(2+),Fe~(2+),Fe~(2+),Zn~(2+)对该酶有显著抑制作用;Mn~(2+),Mg~(2+)对酶有微弱抑制作用,Li~+、Na~+对酶活影响不大。
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| 关 键 词： | α-淀粉酶 马铃薯 毕赤酵母 表达与纯化 酶学性质 |
| 收稿时间： | 2014-02-11 |
The Study on Expression,Purification and Characterization of α-amylase from Solanum tuberosum in P.pastoris |
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| WANG Yong-gang,MA Yan-lin,MA Jian-zhong,MA Xue-qing,REN Hai-wei.The Study on Expression,Purification and Characterization of α-amylase from Solanum tuberosum in P.pastoris[J].China Biotechnology,2014,34(9):56-62. |
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| Authors: | WANG Yong-gang MA Yan-lin MA Jian-zhong MA Xue-qing REN Hai-wei |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | α-amylase Solanum tuberosum P pastori Expression and purification Enzyme characterization |
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