| 毕赤酵母工程菌表达乙肝表面抗原结合蛋白(SBP)的发酵纯化工艺研究 |
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| 引用本文： | 董越,苏彩霞,杨艳,朱乃硕.毕赤酵母工程菌表达乙肝表面抗原结合蛋白(SBP)的发酵纯化工艺研究[J].中国生物工程杂志,2014,34(12):59-68. |
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| 作者姓名： | 董越 苏彩霞 杨艳 朱乃硕 |
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| 作者单位： | 复旦大学 生命科学学院及生物医学研究院 遗传工程国家重点实验室 上海 200433 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(5N136746,30901315,30970144);国家“863”计划重大课题(2011AA02A114);上海市科委科技支撑项目(13431900602);国家新药创制重大专项(2009ZX0913710);国家传染病重大专项(2012ZX10002006002003)资助项目 |
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| 摘 要： | 乙肝表面抗原结合蛋白(HBs Ag binding protein,SBP)是以HBs Ag为探针,通过人肝c DNA噬菌体表达库筛选的一种人源蛋白。SBP可特异性结合乙肝表面抗原(Hepatitis B virus surface antigen,HBs Ag),增强乙肝疫苗的免疫效果,是一种潜在快速高效的免疫佐剂。成功构建了分泌型高表达SBP的毕赤酵母工程菌。对该菌株进行了放大规模发酵表达,并对纯化工艺进行了研究。在发酵实时检测过程中,自诱导剂甲醇加入开始,SBP蛋白的分泌表达量随时间推移而逐渐增加,发现于38h达到最佳水平且此时杂蛋白含量最少,是放罐收集菌液的最佳时间。18L发酵液在低温离心除菌体和沉淀物后可得到15L的上清液,再利用截留量为5k Da的超滤膜包将上清液浓缩至2L,将浓缩后的上清液依次通过S200分子筛柱和TDEAE阴离子交换柱进行分离纯化,可得到300ml浓度为1.125mg/ml、纯度达98%的目标蛋白液,发酵液得率为22.5mg/L;最后将蛋白液定量分装冻干低温保存。所获得的放大规模SBP发酵诱导表达条件和SBP蛋白的分离纯化工艺,为SBP蛋白大规模生产奠定了坚实的基础。
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| 关 键 词： | 乙肝表面抗原结合蛋白 毕赤酵母 发酵 纯化工艺 |
| 收稿时间： | 2014-09-02 |
The Study on Fermentation and Purification Process of HBsAg Binding Protein(SBP) in Pichia pastoris |
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| DONG Yue,SU Cai-xia,YANG Yan,ZHU Nai-shuo.The Study on Fermentation and Purification Process of HBsAg Binding Protein(SBP) in Pichia pastoris[J].China Biotechnology,2014,34(12):59-68. |
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| Authors: | DONG Yue SU Cai-xia YANG Yan ZHU Nai-shuo |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | SBP Pichia pastoris Fermentation Purification process |
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