响应曲面法优化心肌肌钙蛋白I在E.coli中表达及纯化

为优化已构建表达人心肌肌钙蛋白I（cTnI）基因工程菌的表达条件，获得纯度较高的cTnI作为抗原用于研制临床上检测心肌梗塞的试剂盒；通过PBD(Plackett Burman Design)设计，考察各因素对目的蛋白cTnI表达的影响，证明诱导时间、pH、KCl浓度是影响最大的三个因素，通过响应曲面法（RSM）优化对cTnI表达影响最大的三个因素，构建回归方程预测cTnI的表达所占总蛋白的百分比，在最优条件下目的蛋白表达所占菌体总蛋白含量的26%。经过硫酸氨沉淀和DEAE-Cellulose离子交换层析，将重组的cTnI蛋白进行纯化，经SDS-PAGE检测后，目的蛋白只有一条带；经Western-blottting和临床检测cTnI试剂盒检测后，证明纯化的cTnI有良好的特性，可以作为免疫动物的抗原，制备特异性强，亲和力好的单克隆抗体，也可以作为临床上标定不同cTnI检测方法的校准物。