| 新型双基因表达盒真核载体的构建及功能验证 |
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| 引用本文： | 杜寿文,李昌,王宇航,任大勇,刘存霞,孙丹丹,朱娜,李沂,秦艳青,金宁一.新型双基因表达盒真核载体的构建及功能验证[J].中国生物工程杂志,2011,31(9):14-20. |
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| 作者姓名： | 杜寿文 李昌 王宇航 任大勇 刘存霞 孙丹丹 朱娜 李沂 秦艳青 金宁一 |
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| 作者单位： | 1. 吉林大学畜牧兽医学院 长春 130062;
2. 军事医学科学院军事兽医研究所 全军基因工程重点实验室 长春 130122 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，军内"十一五"科技攻关项目，吉林省高新技术产业发展项目(2010)，长春市科技特派员行动计划 |
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| 摘 要： | 目的: 构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体pVAX2,并对其功能进行验证。方法: 设计一个包含人巨细胞病毒启动子(CMV promoter)、T7启动子、信号肽基因、血凝素A表位基因(HA)、多克隆位点区域(MCS)、c-myc抗原表位、血小板来源的生长因子受体跨膜区域(PDGFR TM)及牛生长激素多腺苷酸化信号(BGH polyA)等八种元素的表达盒Ⅱ(Expressing cassette Ⅱ),在其上下游添加Nru Ⅰ酶切位点后,进行人工化学合成,连接到克隆载体pGH中得pGH-Ⅱ;用Nru Ⅰ酶切pGH-Ⅱ,回收1 300bp左右的片段,去磷后插入到pVAX1的相应位点,Nru Ⅰ及Bgl Ⅱ/Pst Ⅰ酶切鉴定,获得新型基因疫苗真核表达载体pVAX2;然后以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,将其分别构建至两个不同的表达盒内,脂质体转染BHK-21细胞,利用RT-PCR及荧光显微镜技术进行该载体的功能验证。结果: 两个表达盒内的EGFP基因在BHK-21细胞均能高效表达,相互间不受影响,且新构建的表达盒具有蛋白展示功能。结论: 成功构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体pVAX2,为多价DNA疫苗的研究奠定了坚实基础。
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| 关 键 词： | pVAX2 EGFP 双基因表达盒 功能验证 |
| 收稿时间： | 2011-05-05 |
| 修稿时间： | 2011-07-08 |
Construction and Verification of Neotype Expression Vector Containing Two Expression Cassettes |
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| DU Shou-wen,LI Chang,WANG Yu-hang,REN Da-yong,LIU Cun-xia,SUN Dan-dan,ZHU Na,LI Yi,QIN Yan-qing,JIN Ning-yi.Construction and Verification of Neotype Expression Vector Containing Two Expression Cassettes[J].China Biotechnology,2011,31(9):14-20. |
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| Authors: | DU Shou-wen LI Chang WANG Yu-hang REN Da-yong LIU Cun-xia SUN Dan-dan ZHU Na LI Yi QIN Yan-qing JIN Ning-yi |
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| Institution: | 1 College of Animal Science and Veterinary Medicine,Jilin University,Changchun 130062,China)(2 Genetic Engineering Laboratory,Institute of Military Veterinary,Academy of Military Medical Sciences,Changchun 130122,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | pVAX2 EGFP Two gene expression cassettes Function verification |
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