| 硒蛋白Sep15基因克隆、定点突变及其原核表达 |
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| 引用本文： | 周继昌,李黛淋,汤加勇,赵华,刘小立,朱玉梅,徐健.硒蛋白Sep15基因克隆、定点突变及其原核表达[J].中国生物工程杂志,2011,31(8):12-17. |
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| 作者姓名： | 周继昌 李黛淋 汤加勇 赵华 刘小立 朱玉梅 徐健 |
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| 作者单位： | 1. 深圳市慢性病防治中心分子生物学实验室 深圳 518020;
2. 四川农业大学动物营养研究所 成都 611134 |
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| 基金项目： | 中国博士后科学基金，广东省医学科研基金 |
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| 摘 要： | 克隆鉴定猪硒蛋白Sep15基因( Sep15 ),将其突变实现原核表达,为以猪为模型研究Sep15功能奠定基础。实验以RT-PCR从猪脾总RNA扩增出含开放阅读框(ORF)至poly(A)共1230 bp的 Sep15 cDNA,3'-非翻译区Sec插入元件为2型,489 bp的ORF及对应氨基酸序列与人相应序列的相似度分别为85.1%和92.7%,ORF含一个硒代半胱氨酸(Sec)密码子TGA,定点突变为半胱氨酸(Cys)的TGC后,经载体pET30转入大肠杆菌BL21(DE3),0.4 mmol/L IPTG诱导表达3 h获得融合表达产物;该产物在Western blot检测中与人Sep15 Sec下游肽段的商品化多抗产生特异性免疫印迹。猪 Sep15 被首次成功克隆并鉴定,其Cys突变体的原核表达产物与人Sep15 C-端抗体存在交叉免疫反应。
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| 关 键 词： | Sep15 定点突变 原核表达 猪 |
| 收稿时间： | 2010-11-12 |
Gene Cloning,Site-directed Mutagenesis and Prokaryotic Expression of Porcine Sep15 |
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| ZHOU Ji-chang,LI Dai-lin,TANG Jia-yong,ZHAO Hua,LIU Xiao-li,ZHU Yu-mei,XU Jian.Gene Cloning,Site-directed Mutagenesis and Prokaryotic Expression of Porcine Sep15[J].China Biotechnology,2011,31(8):12-17. |
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| Authors: | ZHOU Ji-chang LI Dai-lin TANG Jia-yong ZHAO Hua LIU Xiao-li ZHU Yu-mei XU Jian |
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| Institution: | ZHOU Ji-chang 1,2 LI Dai-lin 2 TANG Jia-yong 2 ZHAO Hua 2 LIU Xiao-li1 ZHU Yu-mei 1 XU Jian 1(1 Molecular Biology Lab,Shenzhen Center of Chronic Disease Control,Shenzhen 518020,China)(2 Institute of Animal Science,Sichuan Agricultural University,Chengdu 611134,China) |
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| Abstract: | To clone and identify the gene of porcine selenoprotein 15kDa(Sep15),Sep15,conduct the site-directed mutagenesis and prokaryotic expression for the further functional study of Sep15 using pig models.The total RNA was extracted from pig spleen for RT-PCR,and then the Sep15 cDNA sequence of 1230 bp containing the open reading frame(ORF)till to poly(A)tail was cloned.The 489 bp of ORF sequence had 85.1% identity to that of human,while their amino acid sequences had 92.7% identity.Like those in various mammals,... |
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| Keywords: | Sep15 Site-directed mutagenesis Prokaryotic expression Pig |
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