| 带有穿膜肽重组PTD-KLF4的制备及活性鉴定 |
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| 引用本文： | 苏航,余榕捷,刘晓飞,王静静,李晓霞,陈建苏.带有穿膜肽重组PTD-KLF4的制备及活性鉴定[J].中国生物工程杂志,2011,31(9):48-54. |
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| 作者姓名： | 苏航 余榕捷 刘晓飞 王静静 李晓霞 陈建苏 |
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| 作者单位： | 1. 暨南大学再生医学教育部重点实验室 广州 510632;
2. 暨南大学医学院眼科 广州 510632;
3. 暨南大学生物工程研究所 广州 510632 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，中央高校基本科研业务费专项资金 |
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| 摘 要： | KLF4是Kruppel样转录因子(kruppel-like factors, KLF)家族中的一员,是维持胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESCs)全能性的重要转录因子。蛋白质转导结构域(protein transd uction domain, PTD)能够携带大分子进入细胞。为了获得具有穿膜功能的重组KLF4蛋白,利用原核表达载体PKYB表达KLF4与PTD的融合蛋白PTD-KLF4,用Ni柱纯化融合蛋白并作Western blotting鉴定。利用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记PTD-KLF4检测其穿越中国仓鼠卵巢(chinese hamster ovary, CHO)细胞细胞膜的能力;用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)检测重组融合蛋白PTD-KLF4结合目的DNA的活性。结果表明:重组PTD-KLF4可以成功进入细胞、定位细胞核内,穿膜效率为(22.29±2.1)%。重组融合蛋白PTD-KLF4引起细胞形态变化,并具有与目标DNA序列特异结合的能力。重组PTD-KLF4的制备为外源蛋白诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, IPSCs)奠定基础。
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| 关 键 词： | KLF4 重组 蛋白质转导结构域 荧光共振能量转移 |
| 收稿时间： | 2011-05-09 |
| 修稿时间： | 2011-05-23 |
Preparation of Recombinant PTD-KLF4 with Penetrating Peptide and Activity Assay |
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| SU Hang,YU Rong-jie,LIU Xiao-fei,WANG Jing-jing,LI Xiao-xia,CHEN Jian-su.Preparation of Recombinant PTD-KLF4 with Penetrating Peptide and Activity Assay[J].China Biotechnology,2011,31(9):48-54. |
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| Authors: | SU Hang YU Rong-jie LIU Xiao-fei WANG Jing-jing LI Xiao-xia CHEN Jian-su |
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| Institution: | 1,2(1 Key Laboratory for Regenerative Medicine,Ministry of Education,Jinan University,Guangzhou 510632,China)(2 Ophthalmology Department,Medical College,Jinan University,Guangzhou 510632,China)(3 Bioengineering Institute of Jinan University,Guangzhou 510632,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | KLF4 Recombinant PTD(protein transduction domian) FRET(fluorescence resonance energy transfer) |
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