| 6-羟基烟酸3-单加氧酶(NicC)催化反应机理研究 |
| |
| 引用本文： | 王菲,胡春辉,于浩.6-羟基烟酸3-单加氧酶(NicC)催化反应机理研究[J].中国生物工程杂志,2019,39(7):15-23. |
| |
| 作者姓名： | 王菲 胡春辉 于浩 |
| |
| 作者单位： | 青岛农业大学生命科学学院 山东省应用真菌重点实验室 青岛 266109 |
| |
| 基金项目： | * 国家自然科学基金青年项目(31600086);山东省自然科学基金青年基金资助项目(ZR2016CQ06) |
| |
| 摘 要： | 恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)KT2440中的6-羟基烟酸(6HNA)3-单加氧酶(NicC)是烟酸代谢过程中的关键酶。NicC通过在吡啶环上加羟基对吡啶环进行活化,从而使吡啶环可在双加氧酶催化下开环,最终被完全降解。通过去除NicC的N端稀有密码子增加了NicC的表达量,进一步利用Ni-Sepharose重力柱对NicC进行了纯化。通过实验发现,NicC的最适反应温度为30～40℃,最适反应pH为8.0。Cd~(2+)对NicC的酶活有明显的抑制作用。当NADH的浓度为0.25mmol/L时,底物6HNA所对应的NicC的最大酶活为14.1U/mg,K_m值为51.8μmol/L;当6HNA的浓度为0.25mmol/L时,底物NADH所对应的NicC的最大酶活为10.79U/mg,K_m值为15.0μmol/L。通过HPLC和LC-MS分析表明,NicC可以在NADH和氧气的参与下催化6HNA转化生成2,5-二羟基吡啶(2,5-DHP)和甲酸,还可以将对羟基苯甲酸转化生成对苯二酚。同位素标记实验表明,产物2,5-DHP中的氧原子来源于参与反应的氧气。为研究吡啶类化合物微生物代谢提供了理论基础。
|
| 关 键 词： | 6-羟基烟酸3-羟化酶 酶学性质 催化机制 同位素标记 |
| 收稿时间： | 2018-11-23 |
Catalytic Mechanism of 6-Hydroxynicotinic Acid 3-Monooxygenase (NicC) |
| |
| Fei WANG,Chun-hui HU,hao YU.Catalytic Mechanism of 6-Hydroxynicotinic Acid 3-Monooxygenase (NicC)[J].China Biotechnology,2019,39(7):15-23. |
| |
| Authors: | Fei WANG Chun-hui HU hao YU |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | 6-Hydroxynicotinic acid 3-monooxygenase Enzymatic properties Catalytic mechanism Isotope labeling experiments |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国生物工程杂志》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国生物工程杂志》下载免费的PDF全文 |
|
