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大容量人天然抗体库的构建、鉴定及初步应用
引用本文:唐晓明,王清明,杨俊涛,陈吉中,范国才,汪思应.大容量人天然抗体库的构建、鉴定及初步应用[J].中国生物工程杂志,2005,25(10):17-24.
作者姓名:唐晓明  王清明  杨俊涛  陈吉中  范国才  汪思应
作者单位:1. 军事医学科学院放射医学研究所, 北京 100850; 2. 安徽医科大学, 合肥 230032
摘    要:从未经主动免疫的健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,得到了6种VH家族基因,11种VL家族基因,这些抗体基因家族覆盖了人抗体基因多样性的95%以上。采用改进的SOEPCR法将VH基因和VL基因连接成人单链抗体(scFv)基因,并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,将连接产物电转化大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13KO7超感染,构建了库容为5.58×109的噬菌体单链抗体库。采用BstNI酶切法证明,构建的噬菌体单链抗体库具有良好的多样性。以TNF-α为靶,从该抗体库中筛选到了抗TNF-α抗体,这说明该抗体库可用于人源抗体的筛选。

关 键 词:单链抗体(scFv)  噬菌体抗体库  重叠延伸拼接  
收稿时间:2005-04-20
修稿时间:2005-07-18

Construction, Characterization and Preliminary Application of a Large Naive Human Antibody Library
TANG Xiao-ming , WANG Qing-ming YANG Jun-tao CHEN Ji-zhong FAN Guo-cai WANG Si-ying.Construction, Characterization and Preliminary Application of a Large Naive Human Antibody Library[J].China Biotechnology,2005,25(10):17-24.
Authors:TANG Xiao-ming  WANG Qing-ming YANG Jun-tao CHEN Ji-zhong FAN Guo-cai WANG Si-ying
Institution:TANG Xiao-ming 1,2 WANG Qing-ming 1 YANG Jun-tao 1 CHEN Ji-zhong 1 FAN Guo-cai 1 WANG Si-ying 2
Abstract:
Keywords:Single-chain antibody(scFv) Phage antibody library Splicing by overlapping extention(SOE)
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