猪FcγRIII的原核表达及多克隆抗体的制备

目的：构建猪FcγRIII 基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备鼠抗猪 FcγRIII 抗血清。方法：从质粒pTG19-T-FcγRIII中用PCR方法克隆到编码完整猪FcγRIII蛋白分子的基因片段，将其插入到原核表达载体pET-32a中，构建了猪FcγRIII 原核表达载体pET-FcγRIII ,转化大肠杆菌BL21 (DE3) ，IPTG诱导蛋白表达，经尿素洗涤纯化后，以纯化后的融合蛋白FcγRIII-His 为抗原免疫小鼠，获得抗血清。Western blotting、ELISA 法鉴定获得的抗血清，ELISA 结果显示抗体效价为1∶16000，具有高度特异性,免疫印迹结果显示制备的多抗可以与重组猪FcγRIII蛋白特异性结合。结果：成功构建猪FcγRIII原核表达载体，纯化到融合蛋白FcγRIII-His，用纯化的融合蛋白免疫小鼠制备了多克隆抗体，Western blotting、ELISA 法证实多克隆抗体制备成功。结论：成功获得了猪 FcγRIII 多克隆抗体，为进一步研究猪FcγRIII 蛋白的功能奠定了基础。