sTNFRⅡ和VIP融合蛋白的基因克隆表达、纯化及活性检测

可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ（sTNFRⅡ）和血管活性肠肽（VIP）对类风湿性关节炎（RA）均有治疗作用，但两者的作用机制不同。制备两者融合表达蛋白，可能具有更好的防治类风湿关节炎的作用。用含有VIP全基因序列的上游引物和sTNFRⅡ的下游引物，用PCR扩增出由连接序列将VIP和sTNFRⅡ基因连接的片段，再亚克隆到原核表达载体pET32a，在大肠杆菌DH5α内诱导表达。表达的产物经离子交换、疏水层析纯化，并用体外中和试验检测其活性。结果显示：构建的pET32a-VIP-sTNFRⅡ表达载体在大肠杆菌DH5α内包涵体表达，离子交换层析纯化后的融合蛋白有较强的生物活性，为将来应用打下基础。