| 一种基于温敏质粒的新型基因敲除方法 |
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| 引用本文： | 姜娜,王艳春,马志宏,罗琳,刘纯杰.一种基于温敏质粒的新型基因敲除方法[J].中国生物工程杂志,2010,30(3):85-89. |
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| 作者姓名： | 姜娜 王艳春 马志宏 罗琳 刘纯杰 |
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| 作者单位： | 1.北京市农林科学院北京市水产科学研究所 北京 100068
2.军事医学科学院生物工程研究所 北京 100071 |
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| 摘 要： | 基于温敏型质粒而不用线性DNA的方法用于快速敲除沙门氏菌染色体上的目的基因。以伤寒沙门氏菌S.ty2基因组为模板扩增得到的ssaV基因的上下游同源臂，与两端带有FRT位点的卡那霉素抗性基因片段连接到温敏型质粒pHY304，共同构建同源重组载体；然后转化S.ty2，通过筛选得到带有抗性标记的重组菌。通过转入重组酶表达质粒pCP20，去除抗性标记，得到ssaV基因缺失的重组菌，并在 DNA 水平进行了鉴定。建立了一种改进的基于温敏质粒的沙门氏菌的基因敲除方法，此方法也值得在其他革兰氏阴性菌的基因敲除中尝试应用。
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| 关 键 词： | 伤寒沙门氏菌 温敏质粒 λRed重组系统 ssaV 基因敲除 |
| 收稿时间： | 2009-12-14 |
| 修稿时间： | 2010-01-14 |
A Novel Temperatrue Sensitive Plasmid-based Method for Deletion of Chromosomal Genes |
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| JIANG Na, WANG Yan-chun MA Zhi-hong LUO Lin LIU Chun-jie.A Novel Temperatrue Sensitive Plasmid-based Method for Deletion of Chromosomal Genes[J].China Biotechnology,2010,30(3):85-89. |
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| Authors: | JIANG Na WANG Yan-chun MA Zhi-hong LUO Lin LIU Chun-jie |
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| Institution: | JIANG Na1,2 WANG Yan-chun2 MA Zhi-hong1 LUO Lin1 LIU Chun-jie2 (1 Beijing Fisheries Research Institute,Beijing Academy of Agriculture , Forestry Sciences,Beijing 100068,China) (2 Beijing Institute of Biotechnology,Beijing 100071,China) |
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| Abstract: | A temperature sensitive plasmid-based procedure without linear DNA was developed for a rapid deletion of chromosomal target genes in Salmonella.To construct a recombinant vector,homologous regions and kana cassette with two FRT sites were amplified using corresponding templates and cloned into Ts-plasmid pHY304.The produced shuttle vector was then transformed into S.ty2.Under the pressure of temperature and antibiotic,homologous recombination occurred between the vector and genome of the host bacterium and ... |
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| Keywords: | ssaV |
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