| Myxococcus sp.V11海藻糖合酶TreS II分子改造 * |
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| 引用本文： | 赵晓艳,陈允妲,章雅倩,吴晓玉,王飞,陈金印.Myxococcus sp.V11海藻糖合酶TreS II分子改造 *[J].中国生物工程杂志,2020,40(3):79-87. |
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| 作者姓名： | 赵晓艳 陈允妲 章雅倩 吴晓玉 王飞 陈金印 |
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| 作者单位： | 1 江西农业大学生物科学与工程学院 南昌 3300452 江西省果蔬保鲜与质量安全创新中心 南昌 330045 |
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| 基金项目： | * 国家自然科学基金地区科学项目(31560031);江西省自然科学基金(20161BAB204178);江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ160387) |
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| 摘 要： | 来源于黏细菌Myxococcus sp.V11的海藻糖合酶(trehalose synthase, EC 2.4.1.245)TreS II可通过转糖苷作用将麦芽糖转化成为海藻糖,在酶法生产海藻糖上显示出一定的应用潜力,但TreS II对热敏感,在60℃保温3h,酶活性丧失,限制了其应用范围.目的:拟探索TreS II影响热稳定性的氨基酸残基构成,通过对可能的氨基酸位点进行定点突变,以期获得耐热性的突变子,扩大TreS II应用范围.方法: 通过PCR介导的方法对TreS II可能影响到热稳定性的氨基酸Q3,A283,W374,R449和Y537进行定点突变,以野生型重组酶为对照,比较突变型与野生型的最适反应温度和最适反应pH,通过测定不同温度下保存不同时间后的残留酶活,检测突变子的耐热效果.结果: 研究表明突变子Q3D,A283R,W374D,R449Q和Y537H的比酶活与野生型无显著差异,且最适pH 和最适反应温度也未发生改变;A283R,Y537H在60℃条件下,3h后活性剩余68%;Q3D,W374D,R449Q在温度60℃时,3h后活性剩余35%.结论: TreS II分子结构中与金属离子结合的几个氨基酸残基的改变对蛋白质分子的耐热性具有显著影响.
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| 关 键 词： | Myxococcus sp.V11 海藻糖合酶 定点突变 热稳定性 |
| 收稿时间： | 2019-07-27 |
Site-directed Mutagenesis Improves the Thermostability of Trehalose Synthase TreS II from Myxococcus sp.V11 |
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| ZHAO Xiao-yan,CHEN Yun-da,ZHANG Ya-qian,WU Xiao-yu,WANG Fei,CHEN Jin-yin.Site-directed Mutagenesis Improves the Thermostability of Trehalose Synthase TreS II from Myxococcus sp.V11[J].China Biotechnology,2020,40(3):79-87. |
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| Authors: | ZHAO Xiao-yan CHEN Yun-da ZHANG Ya-qian WU Xiao-yu WANG Fei CHEN Jin-yin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Myxococcus sp V11 Trehalose synthase Site-directed mutagenesis Thermostability |
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