| 地衣芽孢杆菌原生质体电转化方法的研究 |
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| 引用本文： | 温赛,杨建国.地衣芽孢杆菌原生质体电转化方法的研究[J].中国生物工程杂志,2015,35(7):76-82. |
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| 作者姓名： | 温赛 杨建国 |
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| 作者单位： | 1. 北京工商大学食品学院 食品风味化学北京市重点实验室 食品添加剂与配料北京高校工程研究中心 北京 100048;
2. 北京化工大学生命科学与技术学院 北京 100029 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(21406005) |
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| 摘 要： | 为了解决地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)工业菌株难以转化的问题,将原生质体制备、电穿孔和原生质体再生技术相结合,建立了一种地衣芽孢杆菌原生质体电击转化方法。在对菌体生长状态、溶菌酶作用时间、电转电压、渗透压保护剂等条件进行优化后,试验了将不同类型的表达载体,即游离型质粒p GJ103(3.3kb)和整合型质粒p AX01(9.3kb),分别转入两株地衣芽孢杆菌工业生产菌株B.licheniformis CICC 10181和B.licheniformis CICC 20204中。实验结果显示,对数生长期后期的菌体酶解40min后制备的地衣芽孢杆菌原生质体得率为96%,再生率达25%以上。原生质体与质粒DNA在最适电压0.6k V/mm下电击转化,并以0.5mol/L山梨醇或甘露醇作为渗透压保护剂进行再生培养后,最终游离型质粒的转化率可达0.88×102~1.1×102CFU/μg p GJ103,整合型质粒的转化率达到0.45×102~0.52×102CFU/μg p AX01。该方法为地衣芽孢杆菌野生工业菌株的遗传改造提供了一种新的、高效的转化手段。
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| 关 键 词： | 地衣芽孢杆菌 原生质体 电转化 |
| 收稿时间： | 2015-04-08 |
Transformation of Undomesticated Strains of Bacillus licheniformis by Protoplast Electroporation |
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| WEN Sai,YANG Jian-guo.Transformation of Undomesticated Strains of Bacillus licheniformis by Protoplast Electroporation[J].China Biotechnology,2015,35(7):76-82. |
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| Authors: | WEN Sai YANG Jian-guo |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bacillus licheniformis Protoplast Electro-transformation |
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