| 乙脑E蛋白主要抗原片段与hsp70肽连接区融合酵母表达载体的构建 |
| |
| 引用本文： | 葛菲菲,邱亚峰,杨耀武,陈溥言.乙脑E蛋白主要抗原片段与hsp70肽连接区融合酵母表达载体的构建[J].中国生物工程杂志,2005,25(B04):244-248. |
| |
| 作者姓名： | 葛菲菲 邱亚峰 杨耀武 陈溥言 |
| |
| 作者单位： | [1]南京农业大学动物医学院传染病组农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室,南京210095 [2]中国预防医学科学院,北京100052 |
| |
| 摘 要： | 构建乙型脑炎E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70（Mycobacterium tuberculosis heat shock protein70，Mt．hsp70）的肽连接区（Binding domain）基因融合表达载体，利用酵母表达系统，为下一步研究肽连接区是否能增强乙型脑炎E蛋白主要抗原片段的免疫原性作准备。以酵母表达载体pPICZα-A为基本单位构建，以酶切位点BamHI连接这2个基因，用电穿孔法转化酵母X-33，Zeocin平板筛选重组子，经甲醇诱导表达后，SDS—PAGE和免疫印迹分析表达产物。E蛋白主要抗原片段与hsp70肽连接区的融合表达载体构建成功，SDS—PAGE显示，其相对分子质量为68kDa，与实际大小相符且为分泌表达，表达量约为97mg／L，经Western印迹验证，抗原性较好。将用同样的酵母表达载体表达的乙脑E蛋白主要抗原片段（另文发表）与上述融合蛋白均以50pmol的量分别对6～8周龄的BALB／c小鼠进行腹膜内注射，3周后进行第二次免疫，从淋巴细胞的增殖和抗体滴度两个方面进行比较，最后得出E—BD融合蛋白在免疫效果方面比乙脑E蛋白主要抗原片段效果要好，在试验中肽连接区可以增强乙型脑炎E蛋白主要抗原片段的免疫原性。
|
| 关 键 词： | 乙脑E蛋白主要抗原片段 结核杆菌hsp70肽连接区 巴斯德毕赤酵母 淋巴细胞的增殖 |
| 收稿时间： | 2004-10-08 |
| 修稿时间： | 2004-11-29 |
Construction of Chimeric JEV E-Bindingdomain Plasmid in Methylotrophic Yeast Pichia pastoris |
| |
| GE Fei-fei,QIU Ya-feng,YANG Yao-wu, CHEN Pu-yan.Construction of Chimeric JEV E-Bindingdomain Plasmid in Methylotrophic Yeast Pichia pastoris[J].China Biotechnology,2005,25(B04):244-248. |
| |
| Authors: | GE Fei-fei QIU Ya-feng YANG Yao-wu CHEN Pu-yan |
| |
| Institution: | 1. Key Laboratory of Animal Disease Diagnosis and lmmunology, Ministry of Agriculture at Nanjing Agricultural University Nanjing 210095,China;2. Institute of virology,Chinese Academy of Preventive Medicine Beijing 100052,China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Japanese Encephalitis virus E protein Bindingdomain of Myco-bacterium tuberculosis heat shock protein70 Fusion Pichia pastoris Antigenicity Proliferation of lymphocytes Ab titers |
| 本文献已被 维普 等数据库收录！ |
