| 可直接克隆PCR产物的毕赤酵母分泌型表达载体 |
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| 引用本文： | 张超,刘刚,余少文,邢苗.可直接克隆PCR产物的毕赤酵母分泌型表达载体[J].中国生物工程杂志,2007,27(1):52-58. |
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| 作者姓名： | 张超 刘刚 余少文 邢苗 |
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| 作者单位： | 深圳大学 |
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| 摘 要： | 从毕赤酵母表达载体pPICZαA出发，构建了可直接克隆PCR产物的毕赤酵母分泌型表达载体（毕赤酵母表达型T载体）。设计合适的引物扩增一DNA片段，使该片断的上游含XhoⅠ和Eam1105Ⅰ酶切位点，下游含Eam1105Ⅰ和XbaⅠ酶切位点。通过XhoⅠ和XbaⅠ位点将扩增产物与质粒pPICZαA连接形成重组质粒。用Eam1105Ⅰ酶切重组质粒，回收大片段即得到毕赤酵母表达型T载体pPICZαT。使用该表达型T载体进行了里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ基因（cbh2）的克隆和在巴氏毕赤酵母中的表达。结果表明，使用表达型T载体可以直接克隆PCR产物，而且可以使外源基因在毕赤酵母中成功表达。另一方面，使用该载体时不需要使用限制性内切酶，从而可以避免在所表达蛋白的N-末端引入多余的氨基酸。
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| 关 键 词： | 分泌型表达载体 巴氏毕赤酵母 T-载体 里氏木霉 纤维二糖水解酶 |
| 收稿时间： | 2006-08-17 |
| 修稿时间： | 2006年8月17日 |
A Secretive Pichia pastoris Expression Vector Capable of Direct PCR Product Cloning |
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| ZHANG Chao,LIU Gang,YU Shao-wen,XING Miao.A Secretive Pichia pastoris Expression Vector Capable of Direct PCR Product Cloning[J].China Biotechnology,2007,27(1):52-58. |
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| Authors: | ZHANG Chao LIU Gang YU Shao-wen XING Miao |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | secretive expression vector Pichia pastoris T-vector Trichoderma reesei cellobiohydrolase |
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