用于DNA或RNA去盐、去蛋白及浓缩的一种方便的新方法 |
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引用本文: | M.T.Johnson,B.A.Read,A.M.Monko,G.Pappas,B.A.Johnson,张沁.用于DNA或RNA去盐、去蛋白及浓缩的一种方便的新方法[J].中国生物工程杂志,1987,7(3):60-68. |
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作者姓名: | M.T.Johnson B.A.Read A.M.Monko G.Pappas B.A.Johnson 张沁 |
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作者单位: | E.T.DuPontdeNemoursandCo. |
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摘 要: | 一种新型方便的层析柱,NENSORB~(TM)20核酸纯化柱,已被发展起来,用于从DNA和RNA中除去蛋白、盐、非掺入的放射性核苷酸以及其它低分子量物质。NENSORB20柱的使用免去了酚/氯仿抽提及乙醇沉淀这样一些典型的低得率步骤,也可用于浓缩稀释的核酸溶液。NENSORB20柱已被用来(1)从缺口转译反应混合液中纯化标记的DNA;(2)从SP6RNA聚合酶反应液中纯化标记的RNA探针;(3)纯化有末端~(35)S或~(32)P标记的DNA或RNA;(4)纯化通过M13模板上的引物延伸反应制备出的单链DNA探针;及(5)从限制性酶消化液中纯化DNA片段。 与传统的阴离子交换方法不同,这里洗脱核酸的溶液不需含有盐。DNA和RNA收集在酒精/水溶液中;彻底干燥后,核酸可直接用于进一步的生化反应。在缺口转译、末端标记、克隆、杂交、SP6聚合酶反应、蛋白质反应以及其后的实验中,经NENSORB20柱纯化的DNA或RNA样品都显示出极好的生物学活性。从含有lng到20μg核酸和蛋白的体外反应液中可得到优质、量可重复的收集物(通常60~90%)。
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关 键 词: | DNA探针 纯化 RNA聚合酶 ORB 核酸 实验 蛋白质 样品 掺入 末端标记 |
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