| 一种新型亮氨酸5-羟化酶NmLEH的异源表达、纯化及酶学性质分析 * |
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| 引用本文： | 朱梦露,王雪雨,刘鑫,路福平,孙登岳,秦慧民.一种新型亮氨酸5-羟化酶NmLEH的异源表达、纯化及酶学性质分析 *[J].中国生物工程杂志,2019,39(12):24-34. |
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| 作者姓名： | 朱梦露 王雪雨 刘鑫 路福平 孙登岳 秦慧民 |
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| 作者单位： | 1 １天津科技大学生物工程学院 天津 3004572 天津科技大学工业发酵微生物教育部重点实验室 天津 3004573 工业酶国家工程实验室 天津 30045 |
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| 基金项目： | * 国家自然科学基金(31771911);天津市自然科学基金(16JCQNJC09200);天津市大学生创新创业训练计划项目(1000204) |
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| 摘 要： | 羟基化氨基酸是一种新型氨基酸衍生物,可广泛用作化工材料的前体物及医药合成的中间体。将来源于Nostoc minutum的新型L-亮氨酸5-羟化酶 (NmLEH) 通过重组质粒在大肠杆菌中异源表达。结果表明,在BL21(DE3) 宿主细胞中,诱导温度为25℃,IPTG诱导浓度为0.5mmol/L,诱导10h时,蛋白质表达量最高 (0.45mg/ml);通过Ni-亲和层析和凝胶过滤层析两步分离纯化获得了高度纯化的重组NmLEH蛋白;对NmLEH的酶学性质进行了表征,该酶的最适反应温度为25℃,最适pH 为7.5,在pH 7.0~9.0较为稳定,最适底物为亮氨酸和甲硫氨酸;同源序列分析表明NmLEH属于亚铁和α-酮戊二酸依赖性双加氧酶家族Fe(II)/αKG-Dos],并预测了该酶的保守催化活性位点(H150、D152、H236);通过同源建模得到了该蛋白质的模拟结构,分析了该蛋白质催化活性中心的形成机制。
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| 关 键 词： | 亮氨酸5-羟化酶 表达纯化 酶学性质 底物特异性 催化活性中心 |
| 收稿时间： | 2019-04-24 |
Heterologous Expression,Purification and Enzymatic Properties of a Novel Leucine 5-Hydroxylase |
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| ZHU Meng-lu,WANG Xue-yu,LIU Xin,LU Fu-ping,SUN Deng-yue,QIN Hui-min.Heterologous Expression,Purification and Enzymatic Properties of a Novel Leucine 5-Hydroxylase[J].China Biotechnology,2019,39(12):24-34. |
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| Authors: | ZHU Meng-lu WANG Xue-yu LIU Xin LU Fu-ping SUN Deng-yue QIN Hui-min |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Leucine 5-hydroxylase Expression purification Enzymatic properties Substrate specificity Catalytic active site |
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