| 重组Humicola insolens角质酶的高密度发酵优化 * |
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| 引用本文： | 黄燕,孙益荣,吴敬,宿玲恰.重组Humicola insolens角质酶的高密度发酵优化 *[J].中国生物工程杂志,2019,39(1):63-70. |
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| 作者姓名： | 黄燕 孙益荣 吴敬 宿玲恰 |
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| 作者单位： | 1 江南大学食品科学与技术国家重点实验室 无锡 2141222 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室 无锡 2141223 江南大学 教育部食品安全国际合作联合实验室 无锡 214122 |
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| 基金项目： | * 国家杰出青年基金(31425020);高等学校学科创新引智计划资助项目(B170210) |
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| 摘 要： | 在采用前期已构建的重组菌E.coli BL21(DE3)/pET20b(+)-hic进行高密度发酵制备角质酶时发现,在高诱导强度发酵时,菌体浓度下降明显。同时,通过测定纯化重组角质酶的磷脂水解活性,考察验证了重组酶对宿主细胞的损伤作用。重组酶的磷脂酰乙醇胺活性为9.8U/mg(NPB水解比活力为1 047.6 U/mg),在卵黄平板出现了明显的反应圈现象。在此基础上尝试了高菌体浓度结合高诱导强度的发酵策略,以进一步提高重组酶在3L罐中的表达水平。优化后的最佳条件及结果为:OD600为75时,恒速流加0.8g/(L ·h)的乳糖溶液,发酵24h后,酶活达到最大值4 788.0U/ml,约为摇瓶发酵酶活的28倍,与OD600为50时、流加0.2 g/(L ·h)进行诱导的发酵策略(酶活2 233.0 U/ml)相比,提高幅度约为114.0%,发酵时间缩短40.0%。
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| 关 键 词： | Humicola insolens 角质酶 磷脂酶活性 高密度发酵 |
| 收稿时间： | 2018-09-18 |
Optimization of High Density Fermentation of Recombinant Humicola insolens Cutinase |
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| Yan HUANG,Yi-rong SUN,Jing WU,Ling-qia SU.Optimization of High Density Fermentation of Recombinant Humicola insolens Cutinase[J].China Biotechnology,2019,39(1):63-70. |
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| Authors: | Yan HUANG Yi-rong SUN Jing WU Ling-qia SU |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Humicola insolens Cutinase Phospholipase activity High density fermentation |
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