| 稀有鮈鲫HSP70基因启动子的克隆及功能分析 |
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| 引用本文： | 黄宇,黄书婷,张夕梅,刘堰.稀有鮈鲫HSP70基因启动子的克隆及功能分析[J].中国生物工程杂志,2019,39(10):9-16. |
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| 作者姓名： | 黄宇 黄书婷 张夕梅 刘堰 |
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| 作者单位： | 西南大学生命科学学院 淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室 三峡库区生态环境教育部重点实验室 重庆 400715 |
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| 摘 要： | 热休克蛋白70(HSP70)作为一种分子伴侣,在环境毒理学中受到广泛研究。前期研究表明稀有鮈鲫HSP70基因(GrHSP70)表达量与五氯酚(pentachlorophenol, PCP)处理的浓度和时间在肝脏中呈现剂量/时间-依赖效应。为探究启动子在热休克蛋白70表达调控中的作用,根据已知的GrHSP70 cDNA序列,采用染色体步移技术克隆了GrHSP70的5'侧翼区的核苷酸序列。生物信息学分析从预测的转录起始位点(C)起的5'侧翼区域共1 487bp,潜在的转录因子结合位点包括雌激素响应元件(ERE)、Sp1结合位点(Sp1)、糖皮质激素响应元件(GRE)、TATA结合蛋白(TBP)、CCAAT/增强子蛋白结合位点(C/EBP)、Oct-1结合位点(Oct-1)、GATA转录因子结合位点(GATA-1)等。实验构建了含有启动子缺失片段的萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)和海肾萤光素酶(renilla luciferase)报告基因表达载体,瞬时转染HeLa细胞后,利用双荧光活性检测确定获得的GrHSP70启动子具有启动活性,其核心启动位点位于转录起始点上游-1 487~-1 093bp。同时,用不同浓度PCP暴露成功转染了重组质粒(pGL-HSP70 promoter-Luc+)的HeLa细胞,培养24h后检测双荧光活性,与对照相比,随PCP浓度的增加,荧光活性均显著增加。说明在稀有鮈鲫肝脏中PCP会通过激活GrHSP70启动子来诱导GrHSP70表达,但PCP在稀有鮈鲫体内通过何种机制来调节HSP70的合成,仍然需要进一步研究。
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| 关 键 词： | 稀有鮈鲫 热休克蛋白70 启动子 瞬时转染 功能分析 |
| 收稿时间： | 2019-03-16 |
Cloning and Functional Analysis of the Promoter of HSP70 Gene in Gobiocypris rarus |
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| HUANG Yu,HUANG Shu-ting,ZHANG Xi-mei,LIU Yan.Cloning and Functional Analysis of the Promoter of HSP70 Gene in Gobiocypris rarus[J].China Biotechnology,2019,39(10):9-16. |
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| Authors: | HUANG Yu HUANG Shu-ting ZHANG Xi-mei LIU Yan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Gobiocypris rarus HSP70 Promoter Transient transfection Functional analysis |
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