| miR-17-5p靶向自噬相关蛋白ATG7调控巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染作用的研究 |
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| 引用本文： | 洪丹彤,张帆,王淑娥,王红霞,刘昆梅,徐广贤,霍正浩,郭乐.miR-17-5p靶向自噬相关蛋白ATG7调控巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染作用的研究[J].中国生物工程杂志,2019,39(6):1-8. |
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| 作者姓名： | 洪丹彤 张帆 王淑娥 王红霞 刘昆梅 徐广贤 霍正浩 郭乐 |
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| 作者单位： | 1 宁夏医科大学临床医学院 银川 75002122 宁夏医科大学总医院 宁夏临床病原微生物重点实验室 银川 7500213 宁夏医科大学颅脑疾病重点实验室 银川 7500214 宁夏医科大学基础医学院 宁夏生殖与遗传重点实验室 银川 750021 |
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| 基金项目： | * 国家自然科学基金(81760359);国家自然科学基金(31600744);宁夏高等学校科学研究项目资助项目(NGY2017088) |
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| 摘 要： | 目的:通过研究miR-17-5p对自噬相关基因ATG7的靶向调控机制和对细胞自噬的作用,探究miR-17-5p在结核分枝杆菌介导的自噬途径中的作用及其机制。方法:生物信息学分析得到miR17-5p的靶基因ATG7,通过成功构建载体ATG7野生型(p Mir GLO-ATG7-3'UTR-WT)和突变型,利用双萤光素酶报告系统、Western blot验证miR-17-5p和ATG7的靶向关系,同时构建结核分枝杆菌(H37Ra)感染的人源性THP-1巨噬细胞模型,将做不同处理的细胞分为三组:miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor、miR-17-5p nc。通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测H37Ra感染对miR-17-5p表达量的影响,并且进一步通过Western blot、免疫荧光观察检测LC3蛋白的表达量和自噬小体的数量。结果:MTB感染能够引起miR-17-5p的下调,随着感染复数的增加有明显的降低。而生物信息学预测结果显示miR-17-5p与ATG7具有靶向性,双萤光素酶报告实验、Western blot验证miR-17-5p能够和ATG7靶向结合,并对其进行负调控。进一步通过Western blot、免疫荧光观察发现miR-17-5p mimics组LC3Ⅱ的表达下调,自噬小体表达降低,而miR-17-5p inhibitor组相反。其中对H37Ra感染组与未感染组之间比较,ATG7和LC3Ⅱ蛋白表达明显增强。结论:miR-17-5p直接靶向结合ATG7 3'UTR抑制自噬,在巨噬细胞抗MTB过程中发挥作用。
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| 关 键 词： | 自噬 结核分支杆菌 miR-17-5p ATG7 |
| 收稿时间： | 2018-12-21 |
miR-17-5p Targeting Autophagy Related Protein ATG7 Regulates Macrophages against Mycobacterium tuberculosis Infection |
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| Dan-tong HONG,Fan ZHANG,Shu-e WANG,Hong-xia WANG,Kun-mei LIU,Guang-xian XU,Zheng-hao HUO,Le GUO.miR-17-5p Targeting Autophagy Related Protein ATG7 Regulates Macrophages against Mycobacterium tuberculosis Infection[J].China Biotechnology,2019,39(6):1-8. |
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| Authors: | Dan-tong HONG Fan ZHANG Shu-e WANG Hong-xia WANG Kun-mei LIU Guang-xian XU Zheng-hao HUO Le GUO |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Autophagy Mycobacterium tuberculosis miR-17-5p ATG7 |
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