| 响应曲面法优化心肌肌钙蛋白Ⅰ在E.coli中表达及纯化 |
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| 引用本文： | 杨磊,张春明,王德芝.响应曲面法优化心肌肌钙蛋白Ⅰ在E.coli中表达及纯化[J].中国生物工程杂志,2009,29(10). |
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| 作者姓名： | 杨磊 张春明 王德芝 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院/北京协和医学院放射医学研究所,天津市分子核医学重点实验室,天津,300192 |
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| 基金项目： | 天津市自然科学基金(重点项目) |
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| 摘 要： | 为优化已构建表达人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)基因工程菌的表达条件,获得纯度较高的cTnI作为抗原用于研制临床上检测心肌梗塞的试剂盒;通过PBD(Plackett:Burman Design)设计,考察各因素对目的蛋白cTnI表达的影响,证明诱导时间、pH、KCl浓度是影响最大的三个因素,通过响应曲面法(RSM)优化对cTnI表达影响最大的三个因素,构建回归方程预测cTnI的表达所占总蛋白的百分比,在最优条件下目的蛋白表达所占体总蛋白含量的26%.经过硫酸氨沉淀和DEAE-Cellulose离子交换层析,将重组的cTnI蛋白进行纯化,经SDS-PAGE检测后,目的蛋白只有一条带;经Western-blottting和临床检测cTnI试剂盒检测后,证明纯化的cTnI有良好的特性,可以作为免疫动物的抗原,制备特异性强,亲和力好的单克隆抗体,也可以作为临床上标定不同cTnI检测方法的校准物.
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| 关 键 词： | 心肌肌钙蛋白(cTnI) 响应曲面设计(RSM) 离子交换层析 |
Optimization of Expression by Response Surface Methodology and Purification of Recombinant Human Cardiac Troponin-I(cTnI)in Escherichia coli |
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| YANG Lei,ZHANG Chun-ming,WANG De-zhi.Optimization of Expression by Response Surface Methodology and Purification of Recombinant Human Cardiac Troponin-I(cTnI)in Escherichia coli[J].China Biotechnology,2009,29(10). |
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| Authors: | YANG Lei ZHANG Chun-ming WANG De-zhi |
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