| cTnI-linker-TnC融合蛋白的原核表达及鉴定 |
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| 引用本文： | 龚隆财,罗镇明,杨雁青,王振宇,向军俭,王宏.cTnI-linker-TnC融合蛋白的原核表达及鉴定[J].中国生物工程杂志,2015,35(4):48-53. |
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| 作者姓名： | 龚隆财 罗镇明 杨雁青 王振宇 向军俭 王宏 |
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| 作者单位： | 1. 暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室 广州 510632;
2. 广州市疾病与食品安全免疫学快速检测重点实验室暨南大学分室 广州 510632 |
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| 基金项目： | 广东省战略新兴产业核心技术攻关项目(2012A080800007)资助项目 |
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| 摘 要： | 从PUBMED中查找人心脏cTnI和cTnC的cDNA序列,在两者之间加上15个中性氨基酸残基(G4S)3的linker编码序列,并分别构建原核表达质粒pET32a-cTnI-linker-TnC和pET28a-cTnI-linker-TnC,转化入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达。通过SDS-PAGE电泳和间接ELISA对目的蛋白进行初步鉴定,并优化表达条件以实现目的蛋白的可溶性高表达。用标准抗cTnI单克隆抗体和标准抗cTnC单克隆抗体对目的蛋白进行Western blot鉴定和双抗体夹心ELISA鉴定,同时用八位心肌梗塞患者血清做间接ELISA鉴定。结果表明,cTnI-linker-TnC融合蛋白在表达载体pET32a中实现了可溶性高表达,最佳表达条件为28℃、0.4mmol/L IPTG、诱导表达5h;且融合蛋白具有较好的免疫原性,保存了cTnI和cTnC单体的天然结构,有望成为天然cTnI-TnC复合物的替代物,为下一步制备高特异性的抗cTnI-TnC复合物的单克隆抗体奠定了基础。
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| 关 键 词： | cTnI-linker-TnC 融合蛋白 原核表达 双抗体夹心ELISA |
| 收稿时间： | 2014-12-30 |
Prokaryotic Expression and Identification of cTnI-linker-TnC Fusion Protein |
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| GONG Long-cai,LUO Zhen-ming,YANG Yan-qing,WANG Zhen-yu,XIANG Jun-jian,WANG Hong.Prokaryotic Expression and Identification of cTnI-linker-TnC Fusion Protein[J].China Biotechnology,2015,35(4):48-53. |
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| Authors: | GONG Long-cai LUO Zhen-ming YANG Yan-qing WANG Zhen-yu XIANG Jun-jian WANG Hong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | cTnI-linker-TnC Fusion protein Prokaryotic expression Double antibody sandwich ELISA |
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