| 棘白霉素脱酰酶基因工程菌的构建及应用研究 |
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| 引用本文： | 赵国玲,陶欣艺,王风清,魏东芝.棘白霉素脱酰酶基因工程菌的构建及应用研究[J].中国生物工程杂志,2015,35(1):67-74. |
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| 作者姓名： | 赵国玲 陶欣艺 王风清 魏东芝 |
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| 作者单位： | 华东理工大学生物反应器国家重点实验室 上海 200237 |
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| 基金项目： | 国家"863"科技重大专项资助项目(2012ZX09304009) |
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| 摘 要： | 目的:以Streptomyces lividans TK24为表达宿主,构建高效表达棘白霉素脱酰酶(Ech DA)的基因工程菌。方法:从Actinoplanesutahensis NRRL 12052中获取Ech DA的基因片段,连接到链霉菌表达载体p NW-S1,采用诱导型启动子Plac与组成型启动子Perm E*和PSau3A,依次构建基因工程菌株ZNW-S11、ZNW-S12和ZNW-S13。通过分析启动子对Ech DA分泌表达的影响,确定工程菌的表达能力,随后完善发酵放大的工艺过程,将工程菌株发酵放大到300 L发酵罐水平。结果:成功实现了Ech DA在S.lividans TK24中的诱导分泌表达;在摇瓶水平,Ech DA的酶活可达到125U/L,在24h内可实现对15g/L米卡芬净前体FR901379的完全转化;在300L发酵罐水平,Ech DA的酶活可达到80U/L,可用于10g/LFR901379的完全转化。当前,国内在工业生产中仍使用原始菌A.utahensis来表达Ech DA,而开发的Ech DA基因工程菌,与之相比在生产效率上有了大幅度提升,有助于改良当前棘白霉素类抗生素的生产工艺。
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| 关 键 词： | 变铅青链霉菌 棘白霉素脱酰酶 基因工程 犹他游动放线菌 |
| 收稿时间： | 2014-07-25 |
The Construction and Application of EchDA Genetic Engineering Bacteria |
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| ZHAO Guo-ling,TAO Xin-yi,WANG Feng-qing,WEI Dong-zhi.The Construction and Application of EchDA Genetic Engineering Bacteria[J].China Biotechnology,2015,35(1):67-74. |
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| Authors: | ZHAO Guo-ling TAO Xin-yi WANG Feng-qing WEI Dong-zhi |
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| Keywords: | Streptomyces lividans TK24 Echinocandindeacylase Genetic engineering Actinoplanesutahensis |
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