| 稳定表达Aβ特异性单链抗体的哺乳动物细胞株构建和功能研究 |
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| 引用本文： | 温杰,宋琳琳,张莹,王荷,何金生,洪涛.稳定表达Aβ特异性单链抗体的哺乳动物细胞株构建和功能研究[J].中国生物工程杂志,2017,37(2):1-7. |
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| 作者姓名： | 温杰 宋琳琳 张莹 王荷 何金生 洪涛 |
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| 作者单位： | 1. 北京交通大学理学院生命科学与生物工程研究院 北京 100044;
2. 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 北京 100052 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（81100809，81271417）、北京市自然科学基金（7152090）、中央高校基本科研业务费（2015JBM096）资助项目 |
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| 摘 要： | 构建可以稳定表达Aβ特异性单链抗体(scFv)的哺乳动物细胞株。应用重叠延伸PCR的方法,以前期建立的Aβ特异性单克隆抗体(A8)的轻、重链可变区基因为模板,构建scFv的基因片段,通过(G_4S)_3或p2A两种不同的连接肽(Linker)序列,拼接得到多种形式的scFv基因片段,用于构建真核表达载体。利用脂质体分别转染人宫颈癌细胞(Hela)和中国仓鼠卵巢细胞(CHO),Western blot鉴定scFv的表达情况;以潮霉素筛选获得稳定表达抗Aβ的scFv细胞株,以间接ELISA和斑点印迹分析所得scFv的抗原识别能力;采用体外细胞实验,在超微病理水平分析所得scFv的细胞保护作用。结果:成功构建了Aβ特异性scFv的3个真核表达载体pSecTag2/HygroA-VL-(G_4S)_3-VH、pSecTag2/HygroA-VH-(G_4S)_3-VL和pSecTag2/HygroA-VL-p2A-VH,获得了2株稳定表达Aβ特异性scFv的细胞株Hela-VL-p2A-VH和CHO-VL-(G_4S)_3-VH。Western blot结果表明了相应scFv的正确表达,间接ELISA和斑点印迹结果表明所分泌的细胞上清具有Aβ抗原识别能力,体外实验显示其具有阻断和抑制Aβ寡聚体细胞毒性的作用。稳定表达Aβ特异性单链抗体的细胞株有助于AD免疫治疗基础研究的进一步开展。
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| 关 键 词： | 单链抗体 阿尔茨海默病 β淀粉样肽（A β） |
| 收稿时间： | 2016-09-05 |
Construction and Function of Stable Mammalian Cell Lines Expressing the Aβ-specific Single Chain Fragment Variants |
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| WEN Jie,SONG Lin-lin,ZHANG Ying,WANG He,HE Jin-sheng,HONG Tao.Construction and Function of Stable Mammalian Cell Lines Expressing the Aβ-specific Single Chain Fragment Variants[J].China Biotechnology,2017,37(2):1-7. |
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| Authors: | WEN Jie SONG Lin-lin ZHANG Ying WANG He HE Jin-sheng HONG Tao |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Alzheimer's disease (AD) Amyloid β-peptide (Aβ) Single chain fragment variant (scFv) |
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