| 莱茵衣藻LZTFL1蛋白的多克隆抗体制备及应用 |
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| 引用本文： | 刘雁霞,樊振川.莱茵衣藻LZTFL1蛋白的多克隆抗体制备及应用[J].中国生物工程杂志,2017,37(11):109-115. |
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| 作者姓名： | 刘雁霞 樊振川 |
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| 作者单位： | 天津科技大学大健康生物技术研究所 天津市大健康生物技术国际联合研究中心 天津科技大学食品工程与生物技术学院 天津 300457 |
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| 基金项目： | 国际遗传工程与生物技术中心联合研究资助项目（CRP/CHN15-01） |
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| 摘 要： | 目的:亮氨酸拉链转录因子1(LZTFL1)是一种与纤毛信号转导相关的蛋白质,关于其如何在信号转导中发挥作用以及作用机制目前尚不清楚。莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)是研究纤毛信号传导的模式生物,而目前对莱茵衣藻LZTFL1蛋白的研究甚少,尚未有相应的检测抗体,因此制备LZTFL1多克隆抗体用于后续实验研究。方法:采用RT-PCR技术从C.reinhardtii CC125中提取总RNA,扩增981bp的目的基因Lztfl1,插入到p ET-28a(+)原核表达载体,成功构建p ET-28a(+)-Lztfl1重组质粒,转入E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导后成功表达6×His-LZTFL1融合蛋白,融合蛋白经亲和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,最后采用间接ELISA法测得抗血清效价达到1∶512 000,经Western blot对C.reinhardtii CC125检测具有较高特异性。结果:首次实现了莱茵衣藻LZTFL1蛋白的原核表达,制备出一支兔抗莱茵衣藻LZTFL1蛋白的多克隆抗体,为后续研究LZTFL1蛋白在莱茵衣藻中的结构功能及在纤毛信号转导中的相互作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 蛋白质纯化 免疫荧光 莱茵衣藻 LZTFL1 多克隆抗体 |
| 收稿时间： | 2017-05-08 |
Polyclonal Antibody Preparation and Application of C.reinhardtii LZTFL1 Protein |
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| LIU Yan-Xia,FAN Zhen-Chuan.Polyclonal Antibody Preparation and Application of C.reinhardtii LZTFL1 Protein[J].China Biotechnology,2017,37(11):109-115. |
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| Authors: | LIU Yan-Xia FAN Zhen-Chuan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Polyclonal antibody Immunofluorescence Chlamydomonas reinhardtii LZTFL1 Protein affinity purification |
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