| cxcr2基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 张莉,刘永飞,叶传涛,边培育,雷迎峰,侯立朝.cxcr2基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞的构建与鉴定[J].微生物学免疫学进展,2019(1):19-25. |
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| 作者姓名： | 张莉 刘永飞 叶传涛 边培育 雷迎峰 侯立朝 |
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| 作者单位： | 空军军医大学西京医院麻醉与围术期医学科;空军军医大学唐都医院麻醉科;空军军医大学唐都医院传染科;空军军医大学微生物学教研室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(81871697) |
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| 摘 要： | 目的构建小鼠CXC型趋化因子受体2(CXCR2)基因cxcr2过表达的骨髓间充质干细胞(Bone marrow mes-enchymal stem cell,BMSC)并进行鉴定。方法全骨髓贴壁法分离培养小鼠BMSC,采用流式细胞术检测干细胞抗原1(stem cell antigen-1,SCA-1)、CD44、CD43、CD45、IA/IE表达率,并诱导成骨分化。以含有小鼠cxcr2的质粒为模版进行PCR扩增,将获得的cxcr2克隆到慢病毒载体,命名为p Lenti-cxcr2-GZ;将其与慢病毒包装质粒共转染HEK-293T细胞,收获慢病毒后,通过离心法感染BMSC,经过1μg/mL zeocin压力选择建立了稳定表达CXCR2的小鼠BMSC(CXCR2-BMSC)。采用流式细胞术和RT-PCR分别检测其CXCR2蛋白和m RNA表达水平,Transwell趋化实验检测其迁移能力。结果 90%以上的第3代BMSC表达CD44、SCA-1,几乎不表达IA/IE、CD34、CD45,且成功诱导成骨分化。菌液PCR、质粒双酶切后,琼脂糖凝胶电泳鉴定结果得到特异、大小正确的条带及测序鉴定正确,表明成功构建了p Lenti-cxcr2-GZ表达质粒。流式细胞术和RT-PCR结果显示,CXCR2-BMSC的CXCR2蛋白和m RNA表达水平均明显高于对照组BMSC,差异有统计学意义(P<0.001)。Transwell结果显示,CXCR2-BMSC迁移能力高于对照组BMSC,差异有统计学意义(P<0.01)。结论利用慢病毒系统成功构建了稳定表达CXCR2的BM-SC,cxcr2基因修饰BMSC后可明显增加BMSC的迁移能力。
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| 关 键 词： | CXC型趋化因子受体2 小鼠 骨髓间充质干细胞 细胞迁移 |
Construction and identification of cxcr2 gene in modification mouse bone marrow mesenchymal stem cells |
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| ZHANG Li,LIU Yong-fei,YE Chuan-tao,Bian Pei-yu,LEI Ying-feng,HOU Li-chao.Construction and identification of cxcr2 gene in modification mouse bone marrow mesenchymal stem cells[J].Progress In Microbiology and Immunology,2019(1):19-25. |
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| Authors: | ZHANG Li LIU Yong-fei YE Chuan-tao Bian Pei-yu LEI Ying-feng HOU Li-chao |
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| Institution: | (Department of Anesthesiology, Xijing Hospital, AirForce Military Medical University, Xi'an 710032,Shaanxi Province, China) |
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| Abstract: | ZHANG Li;LIU Yong-fei;YE Chuan-tao;Bian Pei-yu;LEI Ying-feng;HOU Li-chao(Department of Anesthesiology, Xijing Hospital, AirForce Military Medical University, Xi'an 710032,Shaanxi Province, China) |
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| Keywords: | CXC chemokine receptor 2 (CXCR2) Mouse Bone marrow mesenchymal stem cells(BMSC) Cell migration |
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