| PCR技术在猴免疫缺陷病毒(SIV)感染模型中的应用 |
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| 引用本文： | 丛喆,涂新明,蒋虹,魏强,佟巍,孙敏,于浩,秦川.PCR技术在猴免疫缺陷病毒(SIV)感染模型中的应用[J].中国实验动物学报,2005,13(2):84-87. |
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| 作者姓名： | 丛喆 涂新明 蒋虹 魏强 佟巍 孙敏 于浩 秦川 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院实验动物研究所,中国协和医科大学实验动物学部,北京,100021 |
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| 基金项目： | 中国CIPRA项目,由美国NIH资助。 |
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| 摘 要： | 目的(1)建立RT PCR方法,定性测定SIV感染猴血浆中病毒RNA,比较其与传统血浆病毒分离方法的敏感性;(2)建立DNA PCR方法,检测SIV感染猴外周血淋巴细胞(PBMCs)中的前病毒DNA。(3)检验DNA PCR和RNA PCR方法在猴SAIDS模型应用中的实用性和可操作性。方法用SIVmac251静脉感染恒河猴,定期采血,从血浆中提取病毒RNA,以RNA为模板通过RT PCR法扩增,凝胶电泳定性;从感染猴PBMC中提取带有整合的SIV前病毒DNA的细胞基因组DNA,巢式PCR扩增,凝胶电泳定性。结果DNA PCR和RNA PCR经两轮扩增后均得到一长度为477bp的特异条带,测序鉴定确为目的片段。9只实验猴感染SIV后7d,RNA PCR结果为79阳性,DNA PCR结果为100%阳性,而血浆病毒分离只有59阳性;此后一直到感染后的42d,RNA PCR和DNA PCR的结果一直为100%阳性,而血浆病毒分离阳性率在感染后35d下降到49,到42d时下降为零。结论PCR方法比病毒分离方法的敏感性高。尤其是DNA PCR,既可检测具有活跃病毒复制的受感染细胞,又可检测那些携带病毒处于转录休眠期的细胞,所以在感染的早期和中后期———血浆病毒水平较低的情况下或病毒处于潜伏感染的阶段,它作为猴艾滋病(SAIDS)模型病毒学指标之一有其必要性和重要性。这个指标的检测方法应该是较血浆病毒RNA检测更为敏感。
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| 关 键 词： | 猴免疫缺陷病毒(SIV) RT PCR 巢式PCR 外周血淋巴细胞(PBMCs) 病毒分离 |
| 文章编号： | 1005-4847(2005)02-0084-04 |
| 修稿时间： | 2005年1月4日 |
Application of PCR Techniques in Detection of Simian Immunodeficiency Virus (SIV) in Monkey Infection Models |
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| CONG Zhe,TU Xin ming,JIANG Hong,TONG Wei,WEI Qiang,SUN Min,YU Hao.Application of PCR Techniques in Detection of Simian Immunodeficiency Virus (SIV) in Monkey Infection Models[J].Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica,2005,13(2):84-87. |
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| Authors: | CONG Zhe TU Xin ming JIANG Hong TONG Wei WEI Qiang SUN Min YU Hao |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Simian Immunodeficiency Virus (SIV) RT PCR DNA PCR Nested PCR Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) Virus isolation |
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