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小鼠缺氧诱导丝裂原因子基因启动子的结构与功能分析
引用本文:郑丽端,童强松,蔡嘉斌,蒋国松,刘媛,杜志勇,董继华.小鼠缺氧诱导丝裂原因子基因启动子的结构与功能分析[J].中国生物化学与分子生物学报,2008,24(8):735-741.
作者姓名:郑丽端  童强松  蔡嘉斌  蒋国松  刘媛  杜志勇  董继华
作者单位:1. 华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科,武汉,430022
2. 华中科技大学同济医学院附属协和医院外科,武汉,430022
3. 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室,武汉,430022
基金项目:国家自然科学基金,教育部跨世纪优秀人才培养计划
摘    要:缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor, HIMF)是一种肺组织特异性生长因子,可刺激肺细胞增生和再生,但HIMF基因表达调控的机制尚未明确.为探索HIMF基因转录调控机制,首先以小鼠基因组DNA为模板,通过PCR扩增方法获得-348~+61 bp、-302~+61 bp、-131~+61 bp、-68~+61 bp的HIMF启动子片段,再将其定向克隆入pGL3-Basic载体,构建荧光素酶报告基因载体,并制备转录因子ETS-1结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体的介导下,报告基因载体分别瞬时转染正常氧浓度条件下培养的小鼠肺上皮MLE-12和MLE-15细胞、结肠癌CT26细胞.结果发现,各HIMF启动子片段在MLE-12、MLE-15细胞中均有活性,但在CT26细胞中活性缺失;-302~-131 bp区存在HIMF启动子的核心调控元件.针对该区域ETS-1转录因子结合位点进行突变或缺失,能导致HIMF启动子活性显著降低;凝胶电泳迁移率实验表明,该区段能结合ETS-1.结果提示,转录因子ETS-1参与正常氧浓度下HIMF启动子活性的调控,为研究HIMF基因的转录调控机制奠定了实验基础.

关 键 词:缺氧诱导丝裂原因子  启动子  报告基因  结构与功能  
收稿时间:2008-2-23

Structural and Functional Analysis of Mouse Hypoxiainduced Mitogenic Factor Promoter
ZHENG Li-Duan,TONG Qiang-Song,CAI Jia-Bin,JIANG Guo-Song,LIU Yuan,DU Zhi-Yong,DONG Ji-Hua.Structural and Functional Analysis of Mouse Hypoxiainduced Mitogenic Factor Promoter[J].Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology,2008,24(8):735-741.
Authors:ZHENG Li-Duan  TONG Qiang-Song  CAI Jia-Bin  JIANG Guo-Song  LIU Yuan  DU Zhi-Yong  DONG Ji-Hua
Institution:1) Department of Pathology, 2) Department of Surgery, 3) Central Laboratory, Union Hospital Affiliated to Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology,
Abstract:
Keywords:hypoxia-induced mitogenic factor  promoter  reporter gene  structural and function
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