| 降低mRNA差异显示技术假阳性率的一种方法 |
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| 引用本文： | 郝纯毅,赵敏,李勇,邢宝才,吕有勇,黄信孚.降低mRNA差异显示技术假阳性率的一种方法[J].中国生物化学与分子生物学报,2002,18(1):110-114. |
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| 作者姓名： | 郝纯毅 赵敏 李勇 邢宝才 吕有勇 黄信孚 |
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| 作者单位： | 北京大学临床肿瘤学院,北京,100036 |
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| 摘 要： | 为了探讨降低mRNA差异显示技术假阳性率的方法 ,进一步提高此技术的可靠性 ,提取了手术切除肝癌及非癌肝组织成对标本的总RNA ,逆转录获得cDNA片段 ,以mRNA差异显示方法筛选差异表达基因 ,选取较明显的一条差异表达条带 ,行进一步PCR扩增 .分别对PCR产物及其经TA克隆后随机挑选的 6个单克隆质粒DNA进行序列分析 ,并通过GenBank BLAST数据库进行序列的同源性比较 ,以Northern杂交予以来源确认 .自 72 0余条扩增条带中共选出 2 8条差异条带 .序列分析及同源性比较表明 ,所选择条带的PCR产物为一可能的新基因片段 ;而随机选择的 6个TA克隆质粒DNA中 ,有 4个为同一已知基因片段 ,一个为另一已知基因片段 ,一个为一可能的新基因片段 .同源性比较表明 ,PCR产物直接测序所得序列与TA克隆质粒DNA的 6个片段不具同源性 .结果表明 ,mRNA差异显示条带可能由 1条以上分子量相似的片段构成 ,直接对PCR产物行序列分析并以其为探针进行Northern杂交 ,是导致出现假阳性片段的原因之一 .将PCR产物进行TA克隆 ,对单克隆质粒DNA进行序列分析并以其为探针进行Northern杂交 ,可能是解决此问题的一种较好方法 .
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| 关 键 词： | mRNA差异显示 基因表达 肝癌 |
| 收稿时间： | 2002-02-20 |
| 修稿时间： | 2001年3月5日 |
A Technique to Decrease the False Positive Rate of Differential Display PCR |
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| HAO Chun yi,ZHAO Min,LI Yong,XING Bao cai,L You yong,HUANG Xin fu.A Technique to Decrease the False Positive Rate of Differential Display PCR[J].Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology,2002,18(1):110-114. |
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| Authors: | HAO Chun yi ZHAO Min LI Yong XING Bao cai L You yong HUANG Xin fu |
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| Institution: | (School of Oncology, Peking University, Beijing 100036,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | mRNA differential display PCR gene expression hepatocyte carcinoma |
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