内质网膜复合亚基3调控内质网应激影响人畸胎瘤细胞的存活

内质网膜蛋白复合物（endoplasmic reticulum membrane complex，EMC）在跨膜蛋白质的生物发生和膜整合中发挥重要作用。内质网膜复合亚基3(endoplasmic reticulum membrane complex 3，EMC3)是EMC的重要组成部分，但其在生殖细胞中发挥的作用未见报道。本研究通过实时荧光定量PCR法检测18周龄小鼠睾丸、肺、脾、下丘脑组织中的EMC3 mRNA表达水平差异。结果显示，小鼠睾丸中EMC3 mRNA表达水平较高。体外培养人畸胎癌细胞NCCIT，通过不同浓度衣霉素诱导细胞产生内质网应激(endoplasmic reticulum stress，ERS)，应用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法检测其中EMC3、葡萄糖调节蛋白78(glucose regulatory protein，GRP78)、CCAAT-增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT-enhancer-binding protein homologous protein，CHOP)的mRNA及其蛋白质表达水平。结果显示，相对于对照组，EMC3、GRP78、CHOP的mRNA与蛋白质水平表达极显著升高(P< 0.01)，表明衣霉素成功诱导了NCCIT细胞产生内质网应激，EMC3在衣霉素诱导的内质网应激的精原细胞中，mRNA与蛋白质水平表达升高。以NCCIT细胞cDNA为模板，利用PCR法扩增EMC3基因片段，并将其与pRK5-myc载体连接，构建pRK5-myc-EMC3重组质粒，经双酶切鉴定及DNA测序表明：pRK5-myc-EMC3重组质粒构建成功。将重组质粒和空载体分别转染至NCCIT细胞中进行表达，应用实时荧光定量PCR法与CCK8法检测细胞中GRP78、CHOP的mRNA转录水平以及细胞活力。结果显示，EMC3转染组的GRP78、CHOP的mRNA水平表达显著升高(P< 0.05)，细胞活性极显著降低(P< 0.01)，表明EMC3可以在NCCIT细胞中调控内质网应激并抑制细胞存活的发生。综上表明，过表达EMC3能够在精原细胞中调控内质网应激抑制细胞存活，EMC3可能在精原细胞的内质网应激中发挥重要作用。

EMC3 Affects the Survival of Human Teratoma Cells by Regulating Endoplasmic Reticulum Stress