| 利用荧光指示分子IeGFP比较vip3A和cry1Ia基因启动子活性 |
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| 引用本文： | 高建华,欧阳春平,钱红梅,刘小琼,郭俊佩,赵雄伟,王兴春,韩渊怀,李旭凯,侯思宇.利用荧光指示分子IeGFP比较vip3A和cry1Ia基因启动子活性[J].中国生物化学与分子生物学报,2021,37(5):617-626. |
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| 作者姓名： | 高建华 欧阳春平 钱红梅 刘小琼 郭俊佩 赵雄伟 王兴春 韩渊怀 李旭凯 侯思宇 |
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| 作者单位： | (1) 山西农业大学生命科学学院, 山西 太谷 030801;2) 中国药科大学中药学院天然药物国家重点实验室，南京 211198;
3) 山西农业大学农学院, 山西 太谷 030801) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（No. 31601690）； 山西省应用基础研究面上青年基金项目（No. 201901D211362）和山西农业大学科技创新基金项目（No. 2017YJ27） |
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| 摘 要： | 苏云金芽孢杆菌（Bt）的Vip3A和Cry1Ia蛋白质序列无同源性，但具有其他相似的特征，例如在孢子形成早期合成，然后跨膜转运至胞外。本研究以新型融合荧光蛋白IeGFP为报告分子，比较vip3A（Pv）和cry1Ia基因（Pi）启动子的调控模式和活性。结果表明，在大肠杆菌中，两者均为组成型启动子。通过荧光信号强度的比较发现，在大肠杆菌中，Pi活性显著强于乳糖操纵子调节基因启动子（PlacI, P<0.01），但比PlacI增强型突变体（PlacIq, P<0.01）和cry1Ac基因启动子（Pac, P<0.01）弱。在3个Bt启动子中，Pv活性最弱，接菌12 h后，与PlacI接近（P>0.05）。在Bt菌株中，Pv对IeGFP的表达调控与之前报道的Pi相似。启动子的Shine-Dalgarno（SD）序列与目的基因起始密码子（AUG）之间的间隔区域在调节细菌的蛋白质翻译效率方面发挥重要作用。本研究中构建的大部分Pv与Iegfp基因的间隔区域突变，均导致相应大肠杆菌和Bt细胞的荧光强度显著降低（P<0.05），说明融合荧光蛋白IeGFP具有较好的灵敏度。该研究不仅确定了2种启动子在Bt和大肠杆菌中的活性，而且验证了IeGFP指示弱启动子活性的可行性。
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| 关 键 词： | 苏云金芽孢杆菌 vip3A cry1Ia 启动子活性 荧光强度 |
| 收稿时间： | 2020-12-03 |
Comparison of the Promoter Activity of vip3A and cry1Ia using IeGFP as a Fluorescent Reporter |
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| GAO Jian-Hua,OUYANG Chun-Ping,QIAN Hong-Mei,LIU Xiao-Qiong,GUO Jun-Pei,ZHAO Xiong-Wei,WANG Xing-Chun,HAN Yuan-Huai,LI Xu-Kai,HOU Si-Yu.Comparison of the Promoter Activity of vip3A and cry1Ia using IeGFP as a Fluorescent Reporter[J].Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology,2021,37(5):617-626. |
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| Authors: | GAO Jian-Hua OUYANG Chun-Ping QIAN Hong-Mei LIU Xiao-Qiong GUO Jun-Pei ZHAO Xiong-Wei WANG Xing-Chun HAN Yuan-Huai LI Xu-Kai HOU Si-Yu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bacillus thuringiensis vip3A cry1Ia promoter activity fluorescent intensity |
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