| 牛αS1酪蛋白5′调控序列驱动报告基因LacZ在奶山羊乳腺上皮细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 田雷,李庆章,张莉.牛αS1酪蛋白5′调控序列驱动报告基因LacZ在奶山羊乳腺上皮细胞中的表达[J].中国生物化学与分子生物学报,2007(9). |
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| 作者姓名： | 田雷 李庆章 张莉 |
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| 作者单位： | 乳品科学教育部重点实验室东北农业大学 哈尔滨150030 |
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| 基金项目： | 黑龙江省科学技术计划基金项目(No.GC05B505)~~ |
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| 摘 要： | αS1酪蛋白是牛乳中含量最高的酪蛋白.本研究克隆了牛αS1酪蛋白5′调控序列约1.2kb的片段,应用基因重组技术将其插入lacZ基因上游,构建真核表达载体gαs1p-psv.胶原酶消化法对奶山羊乳腺上皮细胞进行了分离培养,并用免疫荧光法鉴定了乳腺上皮细胞.将重组载体转染奶山羊乳腺上皮细胞,在细胞培养液中,转染后24h可以检测到lacZ基因的表达,之后表达水平有逐渐升高的趋势,72h开始降低,144h降到最低;在细胞破碎液中,转染后24h表达水平最高,之后表达水平有逐渐降低的趋势,144h降到最低.转染细胞的第1代表达水平最高,随细胞传代表达水平降低,传到第3代时基本检测不到表达产物.对转染后的细胞进行了β-半乳糖苷酶原位细胞染色.实验证明,得到的牛αS1酪蛋白5′调控序列能指导外源基因在奶山羊乳腺上皮细胞中表达.
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| 关 键 词： | 山羊乳腺上皮细胞 调控序列 β-半乳糖苷酶 基因表达 |
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