| 荧光热漂移实验体外检测核小体的解聚 |
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| 引用本文： | 郭明欣,张凤慧,邵学勤,赵秀娟,蔡禄,赵宏宇.荧光热漂移实验体外检测核小体的解聚[J].中国生物化学与分子生物学报,2019,35(9):1021-1028. |
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| 作者姓名： | 郭明欣 张凤慧 邵学勤 赵秀娟 蔡禄 赵宏宇 |
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| 作者单位： | （内蒙古科技大学 生命科学与技术学院，内蒙古 包头014010） |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（No. 31760247，No. 61671256）和内蒙古自然科学基金项目（No. 2017MS0303）
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| 摘 要： | 核小体是真核生物染色质的基本组成单元。核小体的解聚可以动态调控诸如DNA复制、转录、重组等以DNA为模板的生物学过程。特定荧光探针分子与蛋白质疏水残基结合后可被激发荧光信号。荧光热漂移（fluorescence thermal shift，FTS）是一种利用该原理检测温度上升时蛋白质变性过程的方法。本文以Widom 601序列为DNA模板，盐透析法体外装配核小体；分别在实时荧光定量PCR仪的VIC和TAMRA通道激发下，利用FTS检测了核小体在Tris-NaCl（TN）缓冲液和HEPES缓冲液中的解聚状态。研究结果发现，DNA对照序列在TN缓冲液中产生的背景噪声较大，VIC通道激发下组蛋白八聚体产生的荧光信号相对较强。FTS检测核小体的结果显示，随着温度的上升核小体的解聚过程分为2个阶段，～71℃和～84℃是核小体解聚速度最快的温度范围，而75℃～80℃是降解速度较慢的阶段。基于FTS基本原理，本研究发展了一种新颖的可用于检测核小体结构稳定性的方法，为核小体与染色质结构相关问题的研究奠定了一定的技术基础。
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| 关 键 词： | 核小体解聚 荧光热漂移 蛋白质疏水结构域 染色质结构 |
| 收稿时间： | 2019-04-23 |
Fluorescence Thermal Shift Assay Detects Depolymerization of Nucleosomes in vitro |
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| GUO Ming-Xin,ZHANG Feng-Hui,SHAO Xue-Qin,ZHAO Xiu-Juan,CAI Lu,ZHAO Hong-Yu.Fluorescence Thermal Shift Assay Detects Depolymerization of Nucleosomes in vitro[J].Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology,2019,35(9):1021-1028. |
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| Authors: | GUO Ming-Xin ZHANG Feng-Hui SHAO Xue-Qin ZHAO Xiu-Juan CAI Lu ZHAO Hong-Yu |
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| Institution: | (School of Life Science and Technology, Inner Mongolia University of Science and Technology, Baotou 014010, Inner Mongolia, China); |
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