| E-box元件修饰端粒酶核心启动子序列及体外转录活性分析 |
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| 引用本文： | 杨应斌,蔡绍皙,于淑惠,杨 力,李 军,余松涛,戴小珍,王星星,晏小清,辛 鑫,宋国立.E-box元件修饰端粒酶核心启动子序列及体外转录活性分析[J].中国生物化学与分子生物学报,2009,25(6):510-514. |
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| 作者姓名： | 杨应斌 蔡绍皙 于淑惠 杨 力 李 军 余松涛 戴小珍 王星星 晏小清 辛 鑫 宋国立 |
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| 作者单位： | 1）重庆大学生物工程学院,重庆400044；2）西南大学生命科学学院,重庆400715;3）西南大学图书馆,重庆400715；;4）第三军医大学西南医院消化科,重庆400038；5）加州大学骨外科与生物工程系,SanDiego0412,美国 |
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| 摘 要： | 人类端粒酶启动子(hTERT启动子)在肿瘤基因治疗中的有效性已经得到了证实. 然而,hTERT启动子有限的肿瘤靶向转录活性困扰着它的临床应用.早期研究已经揭示,核心hTERT启动子上的-34位E-box元件与该启动子的肿瘤靶向转录活性有关.为进一步探索核心hTERT启动子序列3′端富余E-box元件是否能提高启动子的肿瘤靶向转录能力,用化学合成方法在野生型hTERT(WT-hTERT)核心启动子片段(编码蛋白起始子ATG上游-268 bp～-10 bp)的3′端接入3个E-box序列, 构建成修饰型hTERT(Mod-hTERT)启动子. 然后,分别用WT-hTERT和Mod-hTERT启动子去调控增强型绿色荧光蛋白(EGFP)及荧光素酶报告基因在293FT、HepGⅡ、SGC7901、U2OS、以及原代培养人成纤维细胞(PHF)中表达. 结果表明, 在Mod-hTERT启动子的各实验组细胞中,能够在端粒酶阳性的293FT、HepGⅡ及 SGC7901细胞组中观测到EGFP的表达,而在端粒酶阴性的U2OS及PHF细胞组中没有观测到EGFP的表达；在端粒酶阳性的293FT、HepGⅡ和SGC7901细胞株中，Mod-hTERT启动子调控下的荧光素酶活性要高于WT-hTERT启动子组（P＜0.01）; 而在端粒酶阴性的U2OS细胞组中,Mod-hTERT启动子调控下的荧光素酶活性则低于WT-hTERT启动子组（P＜0.01); 在PHF细胞组中，Mod-hTERT启动子组与WT-hTERT启动子组的荧光素酶活性差异不显著(P＞0.05).研究提示,在3′端增加E-box元件可以提高核心hTERT启动子序列的肿瘤靶向转录活性.
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| 关 键 词： | 人类端粒酶启动子 E-box 荧光素酶 增强型绿色荧光蛋白 肿瘤靶向性 |
| 收稿时间： | 2008-11-12 |
| 修稿时间： | 2008-12-28 |
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