复制缺陷型腺病毒载体介导的人凝血因子Ⅷ基因在体内外的高效转移和表达 |
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引用本文: | 姜志龙,卢健,陈诗书.复制缺陷型腺病毒载体介导的人凝血因子Ⅷ基因在体内外的高效转移和表达[J].中国生物化学与分子生物学报,1999,15(1):36-41. |
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作者姓名: | 姜志龙 卢健 陈诗书 |
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作者单位: | 上海第二医科大学生化教研室人类基因治疗研究中心 |
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摘 要: | 为了构建含人凝血因子Ⅷ基因的重组腺病毒载体系统,首先构建了含FⅧ(B结构域缺失型)的载体质粒pAd-hFⅧ和插入内含子结构的pAdI-hFⅧ,经脂质体介导,证明两质粒的目的基因均能在COS-7细胞中表达有凝血活性的FⅧ因子,其中经纯化的载体质粒pAd-hFⅧ与pBHG10经脂质体介导,共转染至293包装细胞,经同源重组和E1蛋白反式互补,形成E1/E3缺失型重组腺病毒载体颗粒Ad-hFⅧ.PCR检则到病理293培养液上清的病毒DNA中具有目的基因扩增片段,证明病毒DNA含有FⅧ基因.经扩增、纯化、滴度测定,用于感染离体细胞COS-7、A549、L929、293.证实该病毒能在上述细胞中高效转移和表达目的基因,其表达量具有一定范围内的剂量依赖性.COS-7细胞中,MOI>1000时,有细胞毒效应,表达量反而下降.经耳缘静脉注射Ad-hFⅧ至家兔后,1~4周能测到一定水平的FⅧ蛋白,1周内升至最高峰.免疫组化研究表明感染的离体细胞和家兔肝等组织均有FⅧ表达,其中肝脏表达最高.为甲型血友病的基因治疗开辟了新途径
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关 键 词: | 腺病毒载体 人凝血因子Ⅷ 基因治疗 |
收稿时间: | 1999-02-20 |
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