| 一种快速提取组织外泌体的分离富集方法 |
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| 引用本文： | 王建立,张子怡,秦伟伟,王程程,杨瑞.一种快速提取组织外泌体的分离富集方法[J].中国生物化学与分子生物学报,2022,38(3):365-371. |
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| 作者姓名： | 王建立 张子怡 秦伟伟 王程程 杨瑞 |
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| 作者单位： | 农业应用新技术北京市重点实验室,北京农学院植物科学技术学院, 北京 102206;北京恩泽康泰生物科技有限公司, 北京 102206 |
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| 基金项目： | 首都科技条件平台创新券项目(No.2024115212)和北京市农委-北农2018年度新型生产经营主体科技能力提升项目(No.1083252001/010)资助 |
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| 摘 要： | 本文提供一种快速提取组织外泌体的分离富集方法。通过将目标组织用机械法切碎,加入组织消化酶进行组织解离和过滤,将获得的组织细胞悬液依次进行差速离心、超离、尺寸排阻和超滤,实现组织高质量外泌体的富集纯化。组织解离方法比较试验中,采用组织消化酶解离组织得到的蛋白质含量更高,获得的外泌体组织来源的蛋白质污染小。富集小鼠心组织、小鼠肝组织、小鼠肾组织、人结肠癌组织、人乳腺癌组织和动脉粥样硬化组织的外泌体,并对其进行纳米粒径追踪和透射电镜观察。结果显示,外泌体的粒径均在30~150 nm内,结构清晰明确。对小鼠肝组织富集的外泌体进行蛋白质印迹分析。结果显示,阳性蛋白质标志物CD9、ALIX和CD63的表达,TSG101弱表达,阴性蛋白质标志物Calnexin无表达。本方法集合多种分离措施,能够达到分离纯化外泌体的作用,同时简化了分离组织外泌体的步骤,相对于其他方法,全程只需要4~5 h,节省了富集时间,所富集的外泌体纯度高、可溶性杂蛋白质污染小,实用性更加广泛。使用微量组织样本富集的外泌体即可满足后续纳米粒径追踪、蛋白质印迹、透射电镜和转录物组等分析。
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| 关 键 词： | 组织 外泌体 分离 富集 |
| 收稿时间： | 2021-05-08 |
A Rapid Method for the Separation and Enrichment of Exosomes from Tissues |
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| WANG Jian-Li,ZHANG Zi-Yi,QING Wei-Wei,WANG Cheng-Cheng,YANG Rui.A Rapid Method for the Separation and Enrichment of Exosomes from Tissues[J].Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology,2022,38(3):365-371. |
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| Authors: | WANG Jian-Li ZHANG Zi-Yi QING Wei-Wei WANG Cheng-Cheng YANG Rui |
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| Institution: | Beijing Key Laboratory for Agricultural Application and New Technique, College of Plant Science and Technology, Beijing University of Agriculture, Beijing 102206, China;Beijing Enze Kangtai Biological Technology Company Limited, Beijing 102206, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | tissue exosome separation enrichment |
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