外切核酸酶Ⅲ介导的DNA分子克隆 |
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引用本文: | 谢昌传,梁耀极,洪丽欣.外切核酸酶Ⅲ介导的DNA分子克隆[J].中国生物化学与分子生物学报,2016,32(1):106-113. |
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作者姓名: | 谢昌传 梁耀极 洪丽欣 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(No. 81402285)资助 |
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摘 要: | DNA克隆技术,作为最基本的现代分子生物学实验技术之一, 已经成为生物医学研究领域的重要研究手段。传统的分子克隆方法需要经过限制性内切酶酶切和DNA连接酶连接的步骤,是否存在合适的酶切位点和DNA连接酶的效率成为影响克隆的重要限制因素。本文描述了一种由外切核酸酶Ⅲ介导的,以3′-5′外切核酸酶活性和细菌细胞内DNA修复机制为理论基础的DNA分子克隆方法,称为不依赖连接酶的分子克隆(ligation-independent cloning, LIC)|证明了该方法的高效性和可靠性,并进一步对酶的用量、反应温度、反应时间、片段载体比例和量等多个参数进行了优化,建立了一种快速、简便和高效的DNA克隆方法。
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关 键 词: | 外切核酸酶Ⅲ 3′-5&prime 核酸外切酶活性 DNA分子克隆 |
收稿时间: | 2015-05-19 |
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