| P53与TRF1、TRF2的体外结合及P53结合功能区的分析 |
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| 引用本文： | 李玲,张波,邹万忠,郑杰,刘俊平.P53与TRF1、TRF2的体外结合及P53结合功能区的分析[J].中国生物化学与分子生物学报,2005,21(1):83-87. |
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| 作者姓名： | 李玲 张波 邹万忠 郑杰 刘俊平 |
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| 作者单位： | 1. 北京大学医学部病理学系,北京,100083
2. Monash大学病理和免疫学系,澳大利亚,墨尔本,3181 |
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| 基金项目： | 澳大利亚国家健康和医学研究协会NHMRC基金资助~~ |
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| 摘 要： | 通过分析端粒结合蛋白TRF1、TRF2与P5 3的体外结合 ,探讨P5 3 端粒途径调节细胞生命活动的分子机制 .GST和 4种人P5 3 GST融合蛋白经大肠杆菌表达、谷胱甘肽 SepharoseTM4B纯化后 ,进行SDS PAGE和考马斯亮篮染色 .人P5 3包括野生型 (1～ 393)、C端缺失体P5 3N5 (2～ 2 93)、N端缺失体P5 32C(95～ 393)、单个氨基酸突变体P5 3R175H(175R→H) .各纯化蛋白的分子量与预计的完全一致 ,且纯化率达 90 %以上 .将纯化的GST和P5 3 GST融合蛋白与人乳腺癌细胞MCF 7细胞蛋白进行体外结合反应 ,Western印迹检测反应物中P5 3和TRF1、TRF2的结合 .野生型P5 3和P5 3 R175H均能沉淀MCF 7中的TRF1、TRF2 ,且结合力相似 ,而单独的GST则无沉淀TRF1、TRF2的作用 .与野生型P5 3和P5 3R175H相比 ,P5 32C与TRF1、TRF2的结合力明显增加 ,P5 3N5与TRF1、TRF2的结合力大大减弱 .表明P5 3和TRF1、TRF2可以进行直接而特异的体外结合 ,且它们的结合为P5 3C端 (2 93～ 393)结构域依赖性 .P5 3和TRF1、TRF2这种结构域依赖性的结合可能与端粒动态变化所诱导的细胞活动有关 .
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| 关 键 词： | P53 端粒重复因子1(TRF1) 端粒重复因子2(TRF2) 体外结合 |
| 收稿时间： | 2005-02-20 |
| 修稿时间： | 2004年4月15日 |
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