过表达PKCε和PKCη在HCC1806细胞中的抗凋亡作用

为探讨PKCε、PKCη对乳腺癌细胞中TNFα诱导凋亡的影响，采用PCR技术，从人肌肉cDNA文库中克隆了全长PKCε和PKCη序列，亚克隆至pcDNA3，转化HCC1806细胞，并选择出稳定的转化细胞株.然后用流式细胞仪检测了PKCε、PKCη过表达对DNA断裂的影响，用Western印迹方法检测了PKCε、PKCη过表达对PARP、caspase 3和caspase 8水解的影响，以及对Bcl-2，Bax表达的影响，和对MAPK磷酸化的影响.流式细胞仪分析DNA含量的结果表明：TNFα处理后，HCC1806/PC、HCC1806/ε、HCC1806/η的sub_G1状态的DNA含量分别为：57.7%、23.3%、14.6%.Western印迹结果表明，当用0.01nmol/L TNFα处理，HCC1806/η中PARP、caspase3、caspase8的水解程度最低，HCC1806/ε中次之，HCC1806/PC最严重；与HCC1806/PC比较，无论用不用TNFα处理，HCC1806/ε都表达更高的Bcl_2，而HCC1806/η不影响Bcl_2的表达.过表达PKCη而不是PKCε抑制了由TNFα引起的p38和JNK的磷酸化，并且是JNK的抑制剂SP600125而不是p38的抑制剂SB220025抑制了PARP的裂解.以上结果显示，过表达PKCε、PKCη可能通过不同的信号途径在HCC1806中起抗凋亡作用，PKCε上调了bcl_2的表达，而PKCη抑制了JNK的磷酸化.