| NF-κB结合位点在LPS诱导人TNF-α基因转录中的调节作用 |
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| 引用本文： | 史须,卜夏,黄家强,熊平,徐勇,李卓娅,龚非力.NF-κB结合位点在LPS诱导人TNF-α基因转录中的调节作用[J].中国生物化学与分子生物学报,2001,17(5):651-655. |
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| 作者姓名： | 史须 卜夏 黄家强 熊平 徐勇 李卓娅 龚非力 |
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| 作者单位： | 1. 北京大学人类疾病基因组研究中心;同济医科大学免疫学教研室
2. 同济医科大学免疫学教研室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重点项目(No.39630320)湖北省自然科学基金项目(No.94J083)资助 |
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| 摘 要： | 为探讨人TNF α基因启动子区域NF κB结合位点对LPS诱导性基因表达的调节作用 ,将构建的含人TNF α基因启动子区域及其不同缺失片段的pGL2萤光素酶报道基因重组体 ,体外转染HL 60细胞 ,观察LPS刺激对TNF基因启动子指导萤光素酶表达的影响 .发现TNF α基因启动子区域的 3个NF κB结合位点的存在是该基因最大组成性表达和LPS诱导性表达所必需 ;将这 3个位点缺失可完全阻断报道基因的LPS诱导性表达 ,并使其组成性表达明显受到抑制 (P <0 .0 0 1) .缺失κB1和κB2位点 ,使基因组成性表达与LPS诱导性表达均减少约 50 % (P <0 .0 1) ,但诱导倍数则与非突变体相近 ;反之 ,用κB3反义寡核苷酸封闭κB3位点 ,保留κB1和κB2功能 ,使LPS诱导性基因表达抑制 70 % (P <0 .0 0 1) ,诱导倍数明显降低 .保留原有κB3位点 ,再将κB3位点取代κB1和κB2位点 ,可使基因组成性和诱导性表达几乎完全恢复 ;将κB3位点向TSS移近 (- 98→ - 52 ) ,取代Sp1位点 ,虽然κB1和κB2位点仍然缺失 ,但仅一个κB3位点即可使基因组成性和LPS诱导性表达恢复到 80 % .用反义寡核苷酸封闭这个κB3位点 ,不但可使TNF α启动子完全丧失对LPS的反应性 ,还可完全阻断所控基因的组成性表达 .结果表明 ,人TNF α启动子区域 3个NF κB位点均参与该
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| 关 键 词： | 核因子κB 肿瘤坏死因子α 萤光素酶报道基因 内毒素 |
| 收稿时间： | 2001-10-20 |
| 修稿时间： | 2001年4月23日 |
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