| 正交设计优化缩叶藓属植物的ISSR-PCR反应体系 |
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| 引用本文： | 沙伟,王助文,曹同.正交设计优化缩叶藓属植物的ISSR-PCR反应体系[J].生物技术,2009,19(5):32-34. |
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| 作者姓名： | 沙伟 王助文 曹同 |
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| 作者单位： | 1. 齐齐哈尔大学生命与科学工程学院,黑龙江,齐齐哈尔,161006
2. 上海师范大学生命与环境科学学院,上海,200234 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目 |
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| 摘 要： | 目的：建立缩叶藓属（Ptychomitrium）植物ISSR-PCR反应的最佳体系。方法：利用正交设计实验的方法,采用引物562,10号材料Ptychomitrium gardneri为模板对缩叶藓属植物的ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素（Mg2＋d、NTPs、引物、模板量、Taq酶量）在4个水平上进行体系优化。结果：确定了缩叶藓属（Ptychomitrium）植物ISSR-PCR反应的最佳体系（25μl）为：Mg2＋浓度为3.2mmol/L、dNTPs浓度为0.96mmol/L、引物浓度为1.04μmol/L、模板量10ng、Taq酶量1.5U。利用该体系,采用引物564在16个材料中能有效扩增。结论：这一优化体系的建立为以后缩叶藓属植物的ISSR遗传多样性的分析奠定了基础。
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| 关 键 词： | 正交设计 ISSR-PCR 缩叶藓 |
Study on Optimization for ISSR-PCR Reaction System of Ptychomitrum using Orthogonal Design |
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| SHA Wei,WANG Zhu-wen,CAO Tong.Study on Optimization for ISSR-PCR Reaction System of Ptychomitrum using Orthogonal Design[J].Biotechnology,2009,19(5):32-34. |
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| Authors: | SHA Wei WANG Zhu-wen CAO Tong |
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| Abstract: | Objective: Develop the most suitable ISSR-PCR system for Ptychomitrum.Method: The orthogonal design was used to optimize inter-simple sequence repeat PCR(ISSR-PCR) amplification system on Ptychomitrum in five factors(Mg~(2+),dNTPs,primer,DNA template and Taq DNA polymerase) at four levels respectively.Result: The most suitable ISSR-PCR system for Ptychomitrum was established,namely 25μl reaction system containing 3.2mmol/L Mg~(2+),0.96mmol/L dNTPs,10ng DNA template,1.04μmol/L primer,and 1.5U Taq DNA polymerase.Using the optimized reaction,16 Ptychomitrum materials were easy amplified with primer 564.Conclusion:The result provided a standardizing program for the analysis of interspecies genetic diversity of Ptychomitrum. |
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| Keywords: | ISSR-PCR |
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