| 用P. pastoris的pAOX1表达系统表达木糖异构酶 |
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| 引用本文： | 易国辉,尹慧祥,张爱联.用P. pastoris的pAOX1表达系统表达木糖异构酶[J].生物技术,2011,21(1). |
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| 作者姓名： | 易国辉 尹慧祥 张爱联 |
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| 作者单位： | 1. 海南医学院,海南,海口,571101
2. 中国热带农业科学院,热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海南,海口571101 |
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| 基金项目： | 中国热带农业科学院院基金，中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目，国家"863"项目 |
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| 摘 要： | 目的:应用P. pastoris的pAOX1表达系统分泌表达重组木糖异构酶.方法:用PCR法从大肠杆菌基因组中扩增木糖异构酶基因(xi).用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切将其基因克隆进P. pastoris表达载体.通过电转法将其木糖异构酶基因重组于P. pastoris基因组,筛选G418抗性700μg/ml的重组子作为工程菌GS115(pPIC9K-xi).在摇瓶中发酵用甲醇诱导表达重组木糖异构酶.用SDS-PAGE分析重组蛋白的表达情况,用糖酵解法对表达产物进行活性分析.结果:木糖异构酶基因在pAOX1的调控下,在P. pastoris中经甲醇诱导能分泌表达,摇瓶发酵2d表达量为35mg/L,表达产物具有代谢木糖的作用.结论:成功地克隆了大肠杆菌的木糖异构酶基因,并实现用pAOX1系统在P. pastoris中表达中木糖异构酶,为用P. pastoris规模化生产重组木糖异构酶奠定了基础.
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| 关 键 词： | 木糖异构酶 |
Using pAOX1 Expression System to Express of Xylose Isomerase in P. pastoris |
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| YI Guo-hui,YIN Hui-xiang,ZHANG Ai-lian.Using pAOX1 Expression System to Express of Xylose Isomerase in P. pastoris[J].Biotechnology,2011,21(1). |
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| Authors: | YI Guo-hui YIN Hui-xiang ZHANG Ai-lian |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | P pastoris pAOX1 |
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