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大质粒DNA疫苗pSVK-CAVA高稳定性宿主菌的筛选与鉴定
引用本文:吴昊,王宇,朱晓明,阎瑾琦,张巍,徐元基,田仁礼,殷小涛,刘姣,王琳,于继云.大质粒DNA疫苗pSVK-CAVA高稳定性宿主菌的筛选与鉴定[J].生物技术,2013,23(1):48-52.
作者姓名:吴昊  王宇  朱晓明  阎瑾琦  张巍  徐元基  田仁礼  殷小涛  刘姣  王琳  于继云
作者单位:1. 中南大学基础医学院免疫学系,湖南长沙,410013
2. 军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850
3. 中南大学公共卫生学院,湖南长沙,410013
4. 解放军316医院,北京,100093
摘    要:目的:从多种大肠杆菌感受态细胞中筛选出适合该研究大分子质粒DNA疫苗的宿主菌,鉴定其达到中试要求。方法:将疫苗质粒pSVK-CAVA(14.7kb)转化4种大肠杆菌化学感受态细胞并提取质粒,通过琼脂糖凝胶电泳实验检测质粒的形态结构。对基因工程菌进行生化检测,并通过连续传代法和酶切鉴定进行稳定性检测,同时将质粒DNA瞬时转染至293T细胞中检测质粒表达能力。选取质粒含量最高和稳定性最好的宿主菌作为原始种子分装冻存,将原始种子库扩大培养,逐级建立好主种子库和工作种子库即三级种子库。通过摇瓶培养实验在4种常用基础培养基中挑选出最适合质粒生产的培养基。结果:确定了XL-10 Gold作为质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的宿主菌,基因工程菌传代稳定性和结构稳定性良好,质粒能在293T细胞中体外表达。筛选出TB培养基为基础培养基,质粒容积产量达到9.9mg/L,比LB培养基提高了接近1倍。结论:该研究筛选出大肠杆菌XL-10 Gold作为质粒DNA疫苗的宿主菌,解决了大质粒在常用宿主菌中不稳定的难题,并对基础培养基进行了初步优化。

关 键 词:宿主菌  DNA疫苗  高稳定性  XL-10  Gold

Screening and Evaluation of the High Stable Host Bacteria for Macromolecular Plasmid DNA Vaccine pSVK-CAVA
WU Hao , WANG Yu , ZHU Xiao-ming , YAN Jin-qi , ZHANG Wei , XU Yuan-ji , TIAN Ren-li , YIN Xiao-tao , LIU Jiao , WANG Lin , YU Ji-yun.Screening and Evaluation of the High Stable Host Bacteria for Macromolecular Plasmid DNA Vaccine pSVK-CAVA[J].Biotechnology,2013,23(1):48-52.
Authors:WU Hao  WANG Yu  ZHU Xiao-ming  YAN Jin-qi  ZHANG Wei  XU Yuan-ji  TIAN Ren-li  YIN Xiao-tao  LIU Jiao  WANG Lin  YU Ji-yun
Institution:1.Department of Immunology,Institute of Basic Medical Sciences,Central South University,Changsha 410013,China; 2.Institute of Basic Medical Sciences,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100850,China; 3.Public Health College,Central South University,Changsha 410013,China;4.The 316th Hospital of PLA,Beijing 100093,China)
Abstract:
Keywords:
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