| SPA-Luc嵌合基因的构建及其融合蛋白活性检测 |
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| 引用本文： | 邹晓华,聂纪芹,吴薇,刘朝奇.SPA-Luc嵌合基因的构建及其融合蛋白活性检测[J].生物技术,2013,23(1):25-29. |
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| 作者姓名： | 邹晓华 聂纪芹 吴薇 刘朝奇 |
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| 作者单位： | 三峡大学分子生物学研究所,湖北宜昌,443002 |
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| 基金项目： | 三峡大学2011年教学研究项目 |
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| 摘 要： | 目的:葡萄球菌A蛋白-荧光素酶(SPA-Luc)原核表达载体的构建,表达,纯化,并对其生物学效应进行初步研究。方法:PCR扩增SPA和Luc基因,并连接到pET28a(+)中,构建原核表达质粒。构建正确的重组质粒转化至E.coliBL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE及Western Blot鉴定,同时用Ni-NTA亲和层析法纯化SPA-Luc蛋白,最后用荧光素酶试剂盒和ELISA检测融合蛋白的生物学活性。结果:成功构建重组质粒pET28a(+)-SPA、pET28a(+)-Luc和pET28a(+)-SPA-Luc,SDS-PAGE及Western Blot证明正确表达了重组蛋白,并获得了纯化的融合蛋白SPA-Luc。荧光素酶试剂盒检测发现该蛋白仍能与IgG结合,并且与兔和鼠的IgG有较高亲和性。ELISA显示SPA-Luc蛋白替代常规二抗检测抗原,具有更高的敏感性。结论:成功的克隆、表达、纯化的SPA-Luc蛋白可用于抗原抗体的检测,且比常规二抗具有更高的敏感性,为进一步研究其在免疫学中的应用奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | 葡萄球菌A蛋白 荧光素酶 融合蛋白 免疫学检测 |
Construction of SPA-Luc Chimeric Genes and Detection of Biological Activity of the Fusion Protein |
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| ZOU Xiao-hua
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NIE Ji-qin
,
WU Wei
,
LIU Chao-qi.Construction of SPA-Luc Chimeric Genes and Detection of Biological Activity of the Fusion Protein[J].Biotechnology,2013,23(1):25-29. |
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| Authors: | ZOU Xiao-hua NIE Ji-qin WU Wei LIU Chao-qi |
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| Institution: | (Institute of Molecular Biology,Three Gorges University,Yichang 443002,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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